WO2021110141A1 - Pan-RAF激酶抑制剂的联芳基化合物 - Google Patents

Pan-RAF激酶抑制剂的联芳基化合物 Download PDF

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WO2021110141A1
WO2021110141A1 PCT/CN2020/133933 CN2020133933W WO2021110141A1 WO 2021110141 A1 WO2021110141 A1 WO 2021110141A1 CN 2020133933 W CN2020133933 W CN 2020133933W WO 2021110141 A1 WO2021110141 A1 WO 2021110141A1
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mmol
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PCT/CN2020/133933
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丁照中
刘希乐
陈曙辉
胡利红
周成亮
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南京明德新药研发有限公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic System
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom

Definitions

  • the present invention discloses a new class of biaryl compounds of Pan-RAF kinase inhibitors, and specifically discloses compounds represented by formula (III), or pharmaceutically acceptable salts thereof, and their usefulness in the treatment of cancer-related diseases application.
  • the mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway is an important signal transduction pathway in the cell, which transfers signals from outside the cell through the specific cascade phosphorylation of RAS/RAF/MEK/ERK In the cell nucleus, the activation of specific genes eventually leads to cell proliferation, apoptosis or differentiation. The excessive activation of this pathway is closely related to the occurrence of many kinds of tumors.
  • RAF is a very important serine/threonine protein kinase in the RAS/RAF/MEK/ERK signaling pathway. It is located downstream of RAS and can be activated by RAS.
  • the RAF family includes three subtypes, ARAF, BRAF, and CRAF (RAF-1), with high homology and similar domains.
  • Wild-type RAF can produce homo- or heterodimers of three subtypes. ARAF and CRAF mutations occur less frequently, and BRAF mutation rates are higher. About 5%-10% of malignant tumors, including 66% of melanoma patients, have BRAF mutations.
  • RAF kinase As a key signal protein downstream of RAS, RAF kinase has important research significance in the treatment of RAS mutant tumors. By inhibiting RAF kinase, it regulates MAPK signal transduction, thereby exerting an effect on the proliferation of RAS mutant tumor cells. Therefore, RAF kinase has become an important target for clinical treatment of tumors.
  • the first-generation BRAF kinase inhibitors Vemurafenib and Dabrafenib have been approved by the FDA for the treatment of cancers with B-Raf V600E mutations. Although Vemurafenib and Dabrafenib have shown promising effects in the treatment of B-Raf V600E mutant melanoma, they still have certain limitations. Most patients who use these two drugs initially shrink their tumors, but relapse within a year (acquired drug resistance); the main mechanism for this resistance is the reactivation of the MAPK signaling pathway. Studies have found that on the basis of the V600E mutation in BRAF, the NRAS mutation can cause the activation of the MAPK pathway in the presence of inhibitors, resulting in drug resistance.
  • the mutant N-Ras promotes the formation of homodimers or heterodimers between B-Raf V600E and C-Raf.
  • the inhibitor binds to a certain monomer of the dimer, it can reduce the affinity of the drug to another monomer, promote the phosphorylation of the monomer without inhibitor, and cause the activation of MEK.
  • the main method to overcome the drug resistance caused by the reactivation of the MAPK pathway is to block the two key sites of the MAPK pathway through the combined use of Raf and MEK inhibitors to delay the development of drug resistance.
  • the development of a new generation of pan-Raf inhibitors to overcome drug resistance and expand the scope of clinical applications is also under development.
  • Pan-RAF inhibitors can inhibit dimer activity and block paradoxcal activation of pathways. , Which can reduce drug resistance.
  • the pan-Raf dimer inhibitors under clinical research mainly include HM95573, TAK-580, BGB-283, LXH254, and LY3009120.
  • the development of these new RAF inhibitors is expected to overcome the resistance of the first-generation inhibitors , To further expand the clinical application.
  • the present invention provides a compound represented by formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • X and Y are independently selected from CH and N;
  • L 1 is selected from -CH 2 -and a single bond
  • Z 1 and Z 2 are independently selected from CH and N;
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, F and C 1 ⁇ 3 alkyl group, a C 1 ⁇ 3 alkyl group optionally substituted with 1, 2 or 3 R a;
  • R 3 is selected from
  • R 4 is selected from H and C 1-3 alkyl group, said C 1-3 alkyl group is optionally substituted with 1, 2 or 3 R b ;
  • R 5 is selected from H and C 1-3 alkyl, said C 1-3 alkyl is optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
  • R 6 is selected from H and F
  • R 7 is selected from H and CN
  • R 8 is selected from H and CH 3 ;
  • R 9 is selected from H, F and CH 3 ;
  • R a is independently selected from F, Cl, Br, I;
  • R b is independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • R c is independently selected from F, Cl, Br, and I, respectively.
  • the above-mentioned compound is selected from formula (I'),
  • X and Y are independently selected from CH and N;
  • Z 1 and Z 2 are independently selected from CH and N;
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, F and C 1 ⁇ 3 alkyl group, a C 1 ⁇ 3 alkyl group optionally substituted with 1, 2 or 3 R a;
  • R 3 is selected from
  • R 4 is selected from H and C 1-3 alkyl group, said C 1-3 alkyl group is optionally substituted with 1, 2 or 3 R b ;
  • R 5 is selected from H and C 1-3 alkyl, said C 1-3 alkyl is optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
  • R 6 is selected from H and F
  • R 7 is selected from H and CN
  • R 8 is selected from H and CH 3 ;
  • R 9 is selected from H, F and CH 3 ;
  • R a is independently selected from F, Cl, Br, I;
  • R b is independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • R c is independently selected from F, Cl, Br, and I, respectively.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • Z 1 and Z 2 are independently selected from CH and N;
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H and C 1 ⁇ 3 alkyl group, a C 1 ⁇ 3 alkyl group optionally substituted with 1, 2 or 3 R a;
  • R 3 is selected from
  • R 4 is selected from H and C 1-3 alkyl group, said C 1-3 alkyl group is optionally substituted with 1, 2 or 3 R b ;
  • R 5 is selected from H and C 1-3 alkyl, said C 1-3 alkyl is optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
  • R 6 is selected from H and F
  • R a is independently selected from F, Cl, Br, I;
  • R b is independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • R c is independently selected from F, Cl, Br, and I, respectively.
  • R 1 and R 2 are independently selected from H and F, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 and R 2 are selected from H, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 4 is selected from H, CH 3 and CH 2 CH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • R 5 is selected from CH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • the structural unit Selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • the structural unit Selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 5 , R 6 , R 7 , R 9 , Z 1 and Z 2 are as defined in the present invention.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 7 are as defined in the present invention.
  • the present invention also provides a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is selected from
  • the present invention also provides compounds of formula (IV-1), (IV-2), (IV-3) and (IV-4) or pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • X 1 is selected from halogen, -SO 2 Me, -OMs, OTf, OTs,
  • X 2 is selected from halogen, OH, -SO 2 Me, -OMs, OTf, OTs and H;
  • R 1 , R 2 , R 5 , R 6 , R 7 , R 9 , X, Y, Z 1 and Z 2 are as defined in the present invention.
  • the present invention also provides a compound of formula (V) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • X 1 is selected from halogen, -SO 2 Me, -OMs, OTf, OTs,
  • the present invention also provides the use of the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of RAF kinase inhibitors.
  • the present invention also provides the use of the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of a medicine for treating cancer.
  • the compound of the present invention has good medicinal properties, good RAF enzyme inhibitory activity and various cell anti-proliferation activities, and at the same time has good in vivo medicinal effects. It is expected to solve the drug resistance problem of the current BRAF V600E mutation cancer treatment and provide effective treatment for RAS mutation cancer.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms that are within the scope of reliable medical judgment and are suitable for use in contact with human and animal tissues. , Without excessive toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of the compound of the present invention, which is prepared from a compound with specific substituents discovered in the present invention and a relatively non-toxic acid or base.
  • a base addition salt can be obtained by contacting the compound with a sufficient amount of base in a pure solution or a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salt or similar salts.
  • the acid addition salt can be obtained by contacting the compound with a sufficient amount of acid in a pure solution or a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include inorganic acid salts including, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, hydrogen carbonate, phosphoric acid, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, Hydrogen sulfate, hydroiodic acid, phosphorous acid, etc.; and organic acid salts, the organic acid includes, for example, acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, Similar acids such as fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid and methanesulfonic acid; also include salts of amino acids (such as arginine, etc.) , And salts of organic acids such as glucuronic acid. Certain specific compounds of the present invention contain basic and
  • the pharmaceutically acceptable salt of the present invention can be synthesized from the parent compound containing acid or base by conventional chemical methods. In general, such salts are prepared by reacting these compounds in free acid or base form with a stoichiometric amount of appropriate base or acid in water or organic solvent or a mixture of both.
  • the compounds of the present invention may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereomers Isomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and their racemic mixtures and other mixtures, such as enantiomers or diastereomer-enriched mixtures, all of these mixtures belong to this Within the scope of the invention.
  • Additional asymmetric carbon atoms may be present in substituents such as alkyl groups. All these isomers and their mixtures are included in the scope of the present invention.
  • enantiomer or “optical isomer” refers to stereoisomers that are mirror images of each other.
  • cis-trans isomer or “geometric isomer” is caused by the inability to rotate freely because of double bonds or single bonds of ring-forming carbon atoms.
  • diastereomer refers to a stereoisomer in which the molecule has two or more chiral centers and the relationship between the molecules is non-mirror-image relationship.
  • wedge-shaped solid line keys And wedge-shaped dashed key Represents the absolute configuration of a three-dimensional center, with a straight solid line key And straight dashed key Indicates the relative configuration of the three-dimensional center, using wavy lines Represents a wedge-shaped solid line key Or wedge-shaped dashed key Or use wavy lines Represents a straight solid line key And straight dashed key
  • tautomer or “tautomeric form” means that at room temperature, the isomers of different functional groups are in dynamic equilibrium and can be transformed into each other quickly. If tautomers are possible (such as in solution), the chemical equilibrium of tautomers can be reached.
  • proton tautomer also called prototropic tautomer
  • proton migration such as keto-enol isomerization and imine-ene Amine isomerization.
  • Valence isomers include some recombination of bonding electrons to carry out mutual transformations.
  • keto-enol tautomerization is the tautomerism between two tautomers of pentane-2,4-dione and 4-hydroxypent-3-en-2-one.
  • the term “enriched in one isomer”, “enriched in isomers”, “enriched in one enantiomer” or “enriched in enantiomers” refers to one of the isomers or pairs of
  • the content of the enantiomer is less than 100%, and the content of the isomer or enantiomer is greater than or equal to 60%, or greater than or equal to 70%, or greater than or equal to 80%, or greater than or equal to 90%, or greater than or equal to 95%, or 96% or greater, or 97% or greater, or 98% or greater, or 99% or greater, or 99.5% or greater, or 99.6% or greater, or 99.7% or greater, or 99.8% or greater, or greater than or equal 99.9%.
  • the term “isomer excess” or “enantiomeric excess” refers to the difference between the relative percentages of two isomers or two enantiomers. For example, if the content of one isomer or enantiomer is 90%, and the content of the other isomer or enantiomer is 10%, the isomer or enantiomer excess (ee value) is 80% .
  • optically active (R)- and (S)-isomers and D and L isomers can be prepared by chiral synthesis or chiral reagents or other conventional techniques. If you want to obtain an enantiomer of a compound of the present invention, it can be prepared by asymmetric synthesis or derivatization with chiral auxiliary agents, in which the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group is cleaved to provide pure The desired enantiomer.
  • the molecule when the molecule contains a basic functional group (such as an amino group) or an acidic functional group (such as a carboxyl group), it forms a diastereomeric salt with an appropriate optically active acid or base, and then passes through a conventional method known in the art The diastereoisomers are resolved, and then the pure enantiomers are recovered.
  • the separation of enantiomers and diastereomers is usually accomplished through the use of chromatography, which uses a chiral stationary phase and is optionally combined with chemical derivatization (for example, the formation of amino groups from amines). Formate).
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specific atom are replaced by substituents, and may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specific atom is normal and the substituted compound is stable of.
  • oxygen it means that two hydrogen atoms are replaced. Oxygen substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it can be substituted or unsubstituted. Unless otherwise specified, the type and number of substituents can be arbitrary on the basis that they can be chemically realized.
  • any variable such as R
  • its definition in each case is independent.
  • the group can be optionally substituted with up to two Rs, and R has independent options in each case.
  • combinations of substituents and/or variants thereof are only permitted if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it means that the linking group is a single bond, and -C 0 alkyl-A means that the structure is actually -A.
  • substituents When the listed substituents do not indicate which atom is connected to the substituted group, such substituents can be bonded via any atom.
  • a pyridyl group can pass through any one of the pyridine ring as a substituent. The carbon atom is attached to the substituted group.
  • the middle linking group L is -MW-, at this time -MW- can be formed by connecting ring A and ring B in the same direction as the reading order from left to right It can also be formed by connecting ring A and ring B in the opposite direction to the reading order from left to right
  • Combinations of the linking groups, substituents, and/or variants thereof are only permitted if such combinations result in stable compounds.
  • any one or more sites of the group can be connected to other groups through chemical bonds.
  • the chemical bond between the site and other groups can be a straight solid bond Straight dashed key Or wavy line Said.
  • the straight solid bond in -OCH 3 means that it is connected to other groups through the oxygen atom in the group;
  • the straight dashed bond in indicates that the two ends of the nitrogen atom in the group are connected to other groups;
  • the wavy lines in indicate that the phenyl group is connected to other groups through the 1 and 2 carbon atoms.
  • C 1-3 alkyl is used to indicate a linear or branched saturated hydrocarbon group composed of 1 to 3 carbon atoms.
  • the C 1-3 alkyl group includes C 1-2 and C 2-3 alkyl groups, etc.; it can be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or multivalent (such as methine) .
  • Examples of C 1-3 alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl) and the like.
  • C n-n+m or C n -C n+m includes any specific case of n to n+m carbons, for example, C 1-12 includes C 1 , C 2 , C 3 , C 4 , C 5 , C 6 , C 7 , C 8 , C 9 , C 10 , C 11 , and C 12 , including any range from n to n+m, for example, C 1- 12 includes C 1-3 , C 1-6 , C 1-9 , C 3-6 , C 3-9 , C 3-12 , C 6-9 , C 6-12 , and C 9-12, etc.; similarly, from n to n +m member means that the number of atoms in the ring is from n to n+m, for example, 3-12 membered ring includes 3-membered ring, 4-membered ring, 5-membered ring, 6-membered ring, 7-membered ring, 8-membered ring, 9-membered
  • leaving group refers to a functional group or atom that can be replaced by another functional group or atom through a substitution reaction (for example, an affinity substitution reaction).
  • representative leaving groups include triflate; chlorine, bromine, iodine; sulfonate groups, such as mesylate, tosylate, p-bromobenzenesulfonate, p-toluenesulfonic acid Esters, etc.; acyloxy groups, such as acetoxy, trifluoroacetoxy and the like.
  • protecting group includes, but is not limited to, "amino protecting group", “hydroxy protecting group” or “thiol protecting group”.
  • amino protecting group refers to a protecting group suitable for preventing side reactions at the amino nitrogen position.
  • Representative amino protecting groups include, but are not limited to: formyl; acyl, such as alkanoyl (such as acetyl, trichloroacetyl or trifluoroacetyl); alkoxycarbonyl, such as tert-butoxycarbonyl (Boc) ; Arylmethoxycarbonyl, such as benzyloxycarbonyl (Cbz) and 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc); arylmethyl, such as benzyl (Bn), trityl (Tr), 1,1-di -(4'-Methoxyphenyl)methyl; silyl group, such as trimethylsilyl (TMS) and tert-butyld
  • hydroxy protecting group refers to a protecting group suitable for preventing side reactions of the hydroxyl group.
  • Representative hydroxy protecting groups include but are not limited to: alkyl groups, such as methyl, ethyl, and tert-butyl; acyl groups, such as alkanoyl groups (such as acetyl); arylmethyl groups, such as benzyl (Bn), p-methyl Oxybenzyl (PMB), 9-fluorenylmethyl (Fm) and diphenylmethyl (diphenylmethyl, DPM); silyl groups such as trimethylsilyl (TMS) and tert-butyl Dimethylsilyl (TBS) and so on.
  • alkyl groups such as methyl, ethyl, and tert-butyl
  • acyl groups such as alkanoyl groups (such as acetyl)
  • arylmethyl groups such as benzyl (Bn), p-methyl Oxybenzyl (P
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art Equivalent alternatives, preferred implementations include but are not limited to the embodiments of the present invention.
  • the structure of the compound of the present invention can be confirmed by conventional methods well known to those skilled in the art. If the present invention relates to the absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed by conventional technical means in the art. For example, single crystal X-ray diffraction (SXRD), the cultured single crystal is collected with a Bruker D8venture diffractometer to collect diffraction intensity data, the light source is CuK ⁇ radiation, and the scanning method: After scanning and collecting relevant data, the direct method (Shelxs97) is further used to analyze the crystal structure to confirm the absolute configuration.
  • the absolute configuration of the compound can also be confirmed by the chiral structure of the raw material and the reaction mechanism of asymmetric synthesis.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • HATU stands for 2-(7-azobenzotriazole)-N,N,N',N'-tetramethylurea hexafluorophosphate
  • HOBt 1-hydroxybenzene Triazole
  • T 3 P stands for tri-n-propyl cyclic phosphoric anhydride
  • Pd 2 dba 3 stands for tris-diphenylacetone-dipalladium
  • Ruphos stands for 2-dicyclohexylphosphorus-2',6'-diisopropoxy -1,1'-biphenyl
  • Brettphos represents (2-dicyclohexylphosphine-3,6-dimethoxy-2',4',6'-triisopropyl-1,1'-biphenyl
  • TBAF stands for tetrabutylammonium fluoride
  • [Ir(COD)OMe] 2 stands for cyclooctadiene methoxy iridium dimer
  • t 1-hydroxy
  • Pd(dppf)Cl 2 stands for diphenylphosphine ferrocene palladium chloride; Pd(dppf)Cl 2 ⁇ DCM stands for two Phenylphosphine ferrocene palladium dichloride complex with dichloromethane; DIAD stands for diisopropyl azodicarboxylate; DIPEA or DIEA stands for diisopropylethylamine; PPh 3 stands for triphenylphosphine; TFA Represents trifluoroacetic acid; THP represents 2-tetrahydropyran; OTHP represents 2-oxotetrahydropyran; TBSCl represents tert-butyldimethylchlorosilane; TBS represents tert-butyldimethylsilyl; OTBS represents tert-butyl Dimethylsiloxy; DMF stands for N,N-dimethylformamide; DMSO stands for dimethyl sulfoxide; EA
  • Figure 1 shows the tumor growth curve of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice after administration of compound 1.
  • Figure 2 shows the body weight of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice during the administration of Compound 1.
  • Figure 3 shows the tumor growth curve of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice after administration of compound 16B.
  • Figure 4 shows the body weight of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice during the administration of compound 16B.
  • the present invention will be described in detail through the following examples, but it is not meant to impose any disadvantageous restriction on the present invention.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art Equivalent alternatives, preferred implementations include but are not limited to the embodiments of the present invention. It will be obvious to those skilled in the art that various changes and improvements can be made to the specific embodiments of the present invention without departing from the spirit and scope of the present invention.
  • Trifluoroacetic acid (616 mg, 5.4 mmol) was added to dichloromethane (2 mL) of 1-1 (54 mg, 90.36 ⁇ mol), and the reaction solution was stirred at 25° C. for 0.5 hour.
  • the reaction solution was diluted with dichloromethane (20 mL), and adjusted to neutral with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate.
  • Compound 1-2 was separated by SFC chiral (chiral column REGIS(s,s) WHELK-O1 (250mm*50mm, 10 ⁇ m), mobile phase A: isopropanol (containing 0.05% DIEA); mobile phase B: carbon dioxide) Compound 1-2A (retention time 3.846 min) and compound 1-2B (retention time 3.966 min) were obtained.
  • Compound 1-2A MS (ESI) m/z: 628.3 [M+H] + , 99.4% (ee%);
  • Compound 1-2B MS (ESI) m/z: 628.3 [M+H] + , 94.3 %(Ee%).
  • Lithium aluminum hydride (9 mg, 237.13 micromole) was added to 7-1 (85 mg, 148.70 micromole) in THF (3 mL), and the reaction solution was stirred at 0°C for 15 minutes. At 0°C, water (10 mL) was added to the reaction solution, extracted with ethyl acetate (15 ⁇ 2 mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated, and separated by column chromatography (HCOOH-MeCN-H 2 O), The compound 7 was obtained.
  • reaction mixture was diluted with ethyl acetate (10mL) and water (15 ⁇ 1mL), extracted with ethyl acetate (20 ⁇ 3mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated, and separated by column chromatography (silica gel) (HCOOH -MeCN-H 2 O) to obtain compound 8-1.
  • Compound 11 was separated by SFC (chiral column DAICEL CHIRALPAK AD-H (250mm*30mm, 5 ⁇ m), mobile phase A: ethanol (containing 0.05% DIEA); mobile phase B: carbon dioxide) to obtain compound 11A (retention time 1.325min) and Compound 11B (retention time 1.422 min).
  • Compound 14 was separated by SFC chiral separation (chiral column DAICEL CHIRALPAK AD (250mm*30mm, 10 ⁇ m), mobile phase A: isopropanol (containing 0.05% DIEA); mobile phase B: carbon dioxide) to obtain compound 14A (retention time 1.702min) ) And compound 14B (retention time 1.815 min).
  • n-butyllithium 23 mL, 2.5M was added to a solution of 16-1 (10 g, 51.96 mmol) in dichloromethane (100 mL), and stirred for 30 minutes.
  • 16-1A 4.92 g, 57.16 mmol was added to the mixed solution, and the temperature was raised to 25°C and stirred for 0.5 hour.
  • Compound 16 was separated by SFC chiral separation (chiral column DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250mm*30mm, 5 ⁇ m), mobile phase A: ethanol (containing 0.05% DIEA); mobile phase B: carbon dioxide) to obtain compound 16A (retention time 1.487 min) ) And compound 16B (retention time 1.590 min).
  • n-butyllithium 500 mL, 2.5M was added to a tetrahydrofuran (500 mL) solution of acetonitrile (54.60 g, 1.33 mol), and stirred for 1 hour.
  • a solution of 11-1 65 g, 439.22 mmol in tetrahydrofuran (200 mL) was added to the mixed solution, stirred for 1 hour, and then heated to 25°C and stirred for 1 hour.
  • test compound and reference compound were diluted to 100 ⁇ M with DMSO, and the compound was diluted 3-fold with Echo to obtain 11 target plates with concentration gradients.
  • Buffer preparation 50mM Tris-HCl (pH 7.4), 3.5mM MgCl 2 , 150mM NaCl, 1mM DTT, 0.02% Triton X-100, H 2 O;
  • the compound of the present invention has good c-RAF enzyme inhibitory activity.
  • Cell culture medium 89% EMEM, 10% fetal bovine serum and 1% penicillin-streptomycin;
  • the compound of the present invention has a certain anti-proliferation activity of Calu-6 cells.
  • Cell culture medium 89% Mc’Coy 5A, 10% fetal bovine serum and 1% penicillin-streptomycin;
  • the compound of the present invention has certain HCT-116 (Kras G13D ) cell anti-proliferation activity.
  • the compound of the present invention has a certain HCT-116ERK phosphorylation inhibitory activity.
  • the compound of the present invention has certain Calu-6ERK phosphorylation inhibitory activity.
  • Cells Human lung cancer Calu-6 cells were cultured in vitro, 0.2Units/mL bovine insulin, 10% fetal bovine serum, 37°C and 5% CO 2 were cultured in EMEM medium. Use pancreatin-EDTA for routine digestion and passage twice a week. When the cell saturation is 80%-90% and the number reaches the requirement, the cells are collected, counted, and inoculated.
  • mice in each group 1: Number of mice in each group; 2: Administration volume parameter: 10 ⁇ L/g based on mouse body weight. If the weight loss exceeds 15%, stop the drug until the body weight is restored to within 10% and then re-administer; 3: 0.5% MC (methyl cellulose).
  • Solutol is polyethylene glycol-15-hydroxystearate.
  • the tumor diameter was measured with vernier calipers twice a week.
  • TGI total tumor growth rate
  • T/C relative tumor growth rate
  • Relative tumor proliferation rate T/C (%) T RTV /C RTV ⁇ 100%
  • TRTV average RTV of the treatment group
  • C RTV average RTV of the negative control group
  • RTV relative tumor volume
  • the data of T RTV and C RTV are taken on the same day.
  • TGI (%) reflects the tumor growth inhibition rate.
  • TGI(%) [1-(Average tumor volume at the end of a certain treatment group-average tumor volume at the start of the treatment group)/(Average tumor volume at the end of treatment in the solvent control group-average tumor volume at the start of treatment in the solvent control group Tumor volume)] ⁇ 100%.
  • the statistical analysis is based on the RTV data at the end of the experiment using SPSS software for analysis.
  • the comparison between groups was analyzed by one-way ANOVA, and the variance was uneven (the F value was significantly different), and the Games-Howell method was used to test. p ⁇ 0.05 considered a significant difference.
  • This experiment evaluated the efficacy of the test substance in a human lung cancer xenograft tumor model, with a solvent control group as a reference.
  • the tumor volume of each group at different time points is shown in Figure 1 and Figure 3.
  • the compound 1 (100mg/kg) of the administration group had a T/C of 18.5% and a TGI of 100.9%. It had a significant tumor-inhibiting effect (P ⁇ 0.01).
  • the tumor-bearing mice of the human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model are in The tumor growth curve after administration of the compound is shown in Figure 1.
  • FIG. 3 shows the tumor growth curve of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice after administration of the compound.
  • the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on the growth of human lung cancer Calu-6 cell subcutaneous xenograft tumor model tumor-bearing mice.
  • mice Test the pharmacokinetic parameters of the compound of the present invention in mice
  • the first group of animals was given the compound at a dose of 2 mg/kg and a concentration of 1 mg/mL by intravenous injection.
  • Plasma samples were collected from the animals at 0.117, 0.333, 1, 2, 4, 7 and 24 hours after administration; the second group of animals were given the compound at a dose of 100 mg/kg and a concentration of 10 mg/mL by gavage.
  • Plasma samples were collected from the animals at 0.0833, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 and 24 hours after administration; the LC-MS/MS method was used to determine the drug concentration at each point, and the kinetic parameters of the tested drug were as follows table:
  • the compound of the invention has good pharmacokinetic properties in mice.

Abstract

一类Pan-RAF激酶抑制剂的联芳基酰胺化合物，具体公开了式(III)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

Pan-RAF激酶抑制剂的联芳基化合物
本申请主张如下优先权：
CN201911242225.7，申请日2019年12月06日；
CN202010367751.2，申请日2020年04月30日；
CN202010652149.3，申请日2020年07月08日。
技术领域
本发明公开了一类新的Pan-RAF激酶抑制剂的联芳基化合物，具体公开了式(III)所示化合物、或其药学上可接受的盐，以及它们在治疗与癌症相关疾病中的应用。
背景技术
丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路是细胞内一条重要的信号转导通路，该通路通过RAS/RAF/MEK/ERK的特异性级联磷酸化将信号由细胞外传入细胞核内，最终导致特定基因的激活，引起细胞增殖、凋亡或分化。该通路过度激活与多种肿瘤的发生密切相关。RAF是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路中一个非常重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，位于RAS的下游，可以被RAS激活。RAF家族包括ARAF、BRAF、CRAF(RAF-1)三种亚型，具有高度的同源性和相似的结构域。野生型RAF能够产生三种亚型的同源或异源二聚体。ARAF和CRAF突变较少发生，BRAF突变率较高。约5％～10％的恶性肿瘤，包括66％的黑色素瘤患者存在BRAF突变。RAF激酶作为RAS下游的关键信号蛋白，在RAS突变基因突变肿瘤的治疗中具有重要的研究意义。通过抑制RAF激酶，调控MAPK信号传导，从而对RAS突变肿瘤细胞的增殖发挥作用。因此，RAF激酶已成为临床治疗肿瘤的重要靶标。
第一代BRAF激酶抑制剂Vemurafenib和Dabrafenib已经被FDA批准用于发生B-Raf V600E突变癌症的治疗。尽管Vemurafenib和Dabrafenib在B-Raf V600E突变黑色素瘤的治疗上表现出可喜的疗效，但依然存在一定的局限性。大多数使用这两种药物的患者起初肿瘤缩小，但在一年内复发(获得性耐药性)；产生这一耐药的主要机制是MAPK信号通路被重新激活。研究发现在BRAF发生V600E突变的基础上，NRAS突变能够在抑制剂的存在下导致MAPK通路激活，产生耐药性。突变的N-Ras促进B-Raf V600E和C-Raf形成同源或异源二聚体。抑制剂结合在二聚体的某个单体上，可降低药物对另一个单体的亲和力，促进无抑制剂作用的单体磷酸化，导致MEK的激活。目前，临床上克服MAPK通路被重新激活导致耐药性的主要方法是通过联合使用Raf和MEK抑制剂阻断MAPK通路的2个关键位点，以延缓耐药性产生。除此之外，开发新一代pan-Raf抑制剂以克服耐药性以及扩展临床应用范围也正在开发中，pan-RAF抑制剂可以抑制二聚体活性，阻断通路的反常激活(paradoxcal activation)，从而可以减耐药性。处于临床研究的的pan-Raf二聚体抑制剂主要有HM95573、TAK-580、BGB-283、LXH254，以及LY3009120等，这些新型RAF抑制剂的研发，有望克服第一代抑制剂的耐药性，进一步扩大临床应用。
发明内容
本发明提供式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2020133933-appb-000001
其中，
X和Y分别独立地选自CH和N；
L选自-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O) 2-；
L 1选自-CH 2-和单键；
Z 1和Z 2分别独立地选自CH和N；
R 1和R 2分别独立地选自H、F和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R a取代；
R 3选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000002
R 4选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R b取代；
R 5选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R c取代；
R 6选自H和F；
R 7选自H和CN；
R 8选自H和CH 3；
R 9选自H、F和CH 3；
R a分别独立地选自F、Cl、Br、I；
R b分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
R c分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，上述化合物选自式(I’)，
Figure PCTCN2020133933-appb-000003
其中，
X和Y分别独立地选自CH和N；
L选自-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O) 2-；
Z 1和Z 2分别独立地选自CH和N；
R 1和R 2分别独立地选自H、F和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R a取代；
R 3选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000004
R 4选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R b取代；
R 5选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R c取代；
R 6选自H和F；
R 7选自H和CN；
R 8选自H和CH 3；
R 9选自H、F和CH 3；
R a分别独立地选自F、Cl、Br、I；
R b分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
R c分别独立地选自F、Cl、Br和I。
本发明提供式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2020133933-appb-000005
其中，
L选自-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O) 2-；
Z 1和Z 2分别独立地选自CH和N；
R 1和R 2分别独立地选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R a取代；
R 3选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000006
R 4选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R b取代；
R 5选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R c取代；
R 6选自H和F；
R a分别独立地选自F、Cl、Br、I；
R b分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
R c分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，上述R 1和R 2分别独立地选自H和F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1和R 2选自H，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000007
Figure PCTCN2020133933-appb-000008
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000009
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，R 4选自H、CH 3和CH 2CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，R 5选自CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000010
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000011
Figure PCTCN2020133933-appb-000012
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000013
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000014
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000015
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000016
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000017
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000018
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000019
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000020
Figure PCTCN2020133933-appb-000021
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000022
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000023
Figure PCTCN2020133933-appb-000024
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2020133933-appb-000025
选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000026
Figure PCTCN2020133933-appb-000027
Figure PCTCN2020133933-appb-000028
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，化合物选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000029
其中，R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R 9、Z 1和Z 2如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，其中，化合物选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000030
其中，R 1、R 2、R 3和R 7如本发明所定义。
本发明还提供化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000031
Figure PCTCN2020133933-appb-000032
在本发明的一些方案中，其中，化合物选自
Figure PCTCN2020133933-appb-000033
Figure PCTCN2020133933-appb-000034
本发明还提供式(IV-1)、(IV-2)、(IV-3)和(IV-4)化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2020133933-appb-000035
Figure PCTCN2020133933-appb-000036
其中，
X 1选自卤素、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs、
Figure PCTCN2020133933-appb-000037
Figure PCTCN2020133933-appb-000038
X 2选自卤素、OH、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs和H；
R 1、R 2、R 5、R 6、R 7、R 9、X、Y、Z 1和Z 2如本发明所定义。
本发明还提供式(V)化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2020133933-appb-000039
其中，X 1选自卤素、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs、
Figure PCTCN2020133933-appb-000040
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备RAF激酶抑制剂中的应用。
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗癌症药物中的应用。
本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
技术效果
本发明化合物类药性良好，具有良好的RAF酶抑制活性和多种细胞抗增殖活性，同时具有良好的体内药效。有望解决当前BRAF V600E突变癌症治疗的耐药性问题，以及为RAS突变类型癌症提供有效治疗。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们 在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000041
和楔形虚线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000042
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000043
和直形虚线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000044
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure PCTCN2020133933-appb-000045
表示楔形实线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000046
或楔形虚线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000047
或用波浪线
Figure PCTCN2020133933-appb-000048
表示直形实线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000049
和直形虚线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000050
除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valence  tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0～2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键，-C 0烷基-A表示该结构实际上是-A。
当一个取代基数量为0时，表示该取代基是不存在的，比如-A-(R) 0表示该结构实际上是-A。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2020133933-appb-000051
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2020133933-appb-000052
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2020133933-appb-000053
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000054
直形虚线键
Figure PCTCN2020133933-appb-000055
或波浪线
Figure PCTCN2020133933-appb-000056
表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2020133933-appb-000057
中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；
Figure PCTCN2020133933-appb-000058
中的波浪线表示通过该苯基集团中的1和2位的碳原子与其他基团相连。
除非另有规定，术语“C 1～3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1～3烷基包括C 1～2和C 2～3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1～3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1- 12包括C 1-3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1- 二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2020133933-appb-000059
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。也可以通过原料的手性结构以及不对称合成的反应机理来确证化合物的绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：HATU代表2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HOBt代表1-羟基苯并三唑；T 3P代表三正丙基环磷酸酐；Pd 2dba 3代表三-二苯丙酮-二钯；Ruphos代表2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯；Brettphos代表(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯；TBAF代表四丁基氟化铵；[Ir(COD)OMe] 2代表环辛二烯甲氧基铱二聚物；tmphen代表3,4,7,8-四甲基-1,10菲萝啉；dtbpy代表4,4’-二叔丁基-2,2’-联吡啶。Pd(dppf)Cl 2代表二苯基膦二茂铁二氯化钯；Pd(dppf)Cl 2·DCM代表二苯基膦二茂铁二氯化钯与二氯甲烷复合物；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DIPEA或DIEA代表二异丙基乙基胺；PPh 3代表三苯基膦；TFA代表三氟乙酸；THP代表2-四氢吡喃；OTHP代表2-氧代四氢吡喃；TBSCl代表叔丁基二甲基氯硅烷；TBS代表叔丁基二甲基硅；OTBS代表叔丁基二甲基硅氧；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EA代表乙酸乙酯；PE代表石油醚；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；DME代表乙二醇二甲醚；DCM代表二氯甲烷；THF代表四氢呋喃；MeCN代表乙腈；NMP代表N-甲基吡咯烷酮；PE/EA代表石油醚与乙酸乙酯体积比；DCM/MeOH代表二氯甲烷与甲醇体积比；HCOOH-MeCN-H 2O代表分离体系为甲酸-乙腈-水；IPA代表异丙醇；Me代表甲基、OMs代表甲烷磺酰基氧基。
附图说明
图1为人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予化合物1后的肿瘤生长曲线。
图2为人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给药化合物1过程中的体重。
图3为人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予化合物16B后的肿瘤生长曲线。
图4为人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给药化合物16B过程中的体重。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
中间体1A-5的合成：
Figure PCTCN2020133933-appb-000060
化合物1A-3
0℃下，向1A-2(192.15毫克，1.31毫摩尔)的THF(1mL)溶液中加入氢化钠(43.81毫克，1.10毫摩尔，60％纯度)，升温至25℃搅拌30分钟。0℃下，向该混合液中加入1A-1(300毫克，1.10毫摩尔)，升温至25℃搅拌2小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并后的萃取液浓缩，经柱层析(PE/EA＝20/1，V/V)分离得1A-3。
化合物1A-5
将1A-3(200毫克，521.36微摩尔)，1A-4(232.96毫克，573.50微摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(38.15毫克，52.14微摩尔)，和碳酸钠(110.52毫克，1.04毫摩尔)置于二氧六环(2mL)和水(0.4mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌2小时。将反应液用水(10mL)稀释，并用二氯甲烷(10×2mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经制备硅胶板(PE/EA＝5/1，V/V)分离，得1A-5。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.00(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.20(d,J＝4.8Hz,1H),7.77(dd,J＝2.2,8.2Hz,1H),7.70(d,J＝2.2Hz,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.12(d,J＝1.0Hz,1H),6.86(d,J＝1.0Hz,1H),4.68-4.64(m,1H),4.52-4.40(m,2H),3.82-3.71(m,2H),3.48-3.41(m,2H),2.26(s,3H),1.75-1.58(m,2H),1.53-1.40(m,4H)。
中间体1A-6的合成：
Figure PCTCN2020133933-appb-000061
化合物1A-6
将1A-1(1.0克，3.65毫摩尔)，1A-4(1.67克，4.11毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(300毫克，367.36微摩尔)，和碳酸钠(774毫克，7.30毫摩尔)置于二氧六环(10mL)和水(2.5mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至70℃并搅拌4小时。将反应液过滤，并用乙酸乙酯(10×3mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝30/1至3/1，V/V)分离，得1A-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.98-8.91(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,1H),8.06(s,1H),7.97-7.92(d,J＝5.0Hz,1H),7.61-7.56(m,2H),7.39-7.30(d,J＝9.0Hz,1H),7.28-7.26(m,2H),2.37-2.22(m,3H)。
中间体1A-8的合成：
Figure PCTCN2020133933-appb-000062
化合物1A-8
将1A-1(785毫克，2.87毫摩尔)，1A-7(1.11克，2.72毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(210毫克，287.0微摩尔)，和碳酸钠(609毫克，5.75毫摩尔)置于DME(10mL)和水(2.5mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至90℃并搅拌2小时。将反应液加入乙酸乙酯(50mL)后过滤，并用水(50×2mL)和饱和食盐水(80×1mL)洗涤，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝20/1至3/1，V/V)分离，得1A-8。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.65(d,J＝2.51Hz,1H),8.26(d,J＝2.51Hz,1H),8.15(s,1H),8.10(d,J＝7.91Hz,1H),8.03(s,1H),7.87(d,J＝7.78Hz,1H),7.69(t,J＝7.78Hz,1H),7.31(s,2H),2.53(s,3H)。
中间体2-1的合成：
Figure PCTCN2020133933-appb-000063
化合物2-1A
向氢化钠(163.18毫克，4.08毫摩尔，60％)，11-2A-1(897.89毫克，4.08毫摩尔)的混合物中加入DMSO(4mL)。在氮气保护下，将反应混合物在20℃并搅拌0.5小时。向反应液中加入11-2 (200毫克，1.02毫摩尔)的DMSO(4mL)溶液，将反应混合物加热至80℃并搅拌2.5小时。向反应混合物中加入水(2mL)和乙酸乙酯(40mL)，用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经制备硅胶板(PE/EA＝5/1，V/V)分离，得化合物2-1A。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.65-7.47(m,1H),7.21-7.02(m,2H),4.11-3.91(m,2H),3.74-3.57(m,1H),3.56-3.37(m,1H),2.55-2.42(m,1H),2.20-2.05(m,1H),1.85-1.71(m,1H),1.39-1.28(m,1H),1.16-1.04(m,1H)。
化合物2-1B
将2-1A-1(395.45毫克，1.56毫摩尔)，[Ir(COD)OMe] 2(23.71毫克，35.77微摩尔)和tmphen(16.91毫克，71.54微摩尔)和醋酸钾(11.5克，117.18毫摩尔)置于MTBE(8mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至80℃并搅拌5分钟。然后加入2-1A(300毫克，1.43毫摩尔)的MTBE(2mL)溶液，80℃并搅拌16小时。反应液过滤，浓缩，得化合物2-1B粗品。MS(ESI):m/z 254.1[M+H-82] +。
化合物2-1C
将2-1B(480毫克，1.43毫摩尔)，2-1B-1(320毫克，1.72毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(117毫克，143微摩尔)，和碳酸钠(454.74毫克，4.29毫摩尔)置于DME(10mL)和水(2mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至80℃并搅拌2小时。将反应液加入乙酸乙酯(20mL)后过滤，滤液用水(20×3mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝20/1至10/1)分离，得化合物2-1C。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.09-7.06(m,2H),7.05(d,J＝1.0Hz,1H),6.70-6.64(m,1H),6.53(d,J＝2.6Hz,1H),4.07-4.00(m,1H),3.99-3.93(m,1H),3.70-3.59(m,3H),3.52-3.42(m,1H),2.56-2.47(m,1H),2.16-2.14(m,3H),2.14(br s,1H),1.75-1.60(m,1H),1.40-1.33(m,1H),1.11(dd,J＝4.2,6.4Hz,1H)。
化合物2-1
向2-1C(100毫克，317.65微摩尔)，2-1C-1(60.71毫克，317.65微摩尔)的DMF(3mL)中，加入HATU(181.17毫克，476.48微摩尔)和DIPEA(123.16毫克，952.96微摩尔)，20℃下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，并用水(10×3mL)洗涤，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥浓缩后，经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)纯化，得化合物2-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.94(d,J＝5.0Hz,1H),8.16-8.06(m,1H),8.00-7.85(m,2H),7.61-7.56(m,1H),7.55-7.51(m,1H),7.36-7.31(m,1H),7.11-7.06(m,2H),4.07-4.01(m,1H),3.99-3.93(m,1H),3.68-3.59(m,1H),3.53-3.43(m,1H),2.57-2.47(m,1H),2.30-2.25(m,3H),2.18-2.08(m,1H),1.88-1.79(m,1H),1.41-1.35(m,1H),1.20-1.10(dd,J＝4.2,6.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:488.1[M+H] +。
中间体14-2A的合成：
Figure PCTCN2020133933-appb-000064
化合物14-2A-2
向14-2A-1(10.5克，54.97毫摩尔)的DMF(100mL)溶液中加入盐酸羟胺(4.77克，68.71毫摩尔)和三乙胺(16.69克，164.90毫摩尔)，20℃搅拌1小时。向反应液中加入T 3P(34.98克，54.97毫摩尔，50％DMF溶液)，20℃搅拌4小时。向反应混合物加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用EtOAc(50mL×3)萃取，合并后的萃取液用无水硫酸钠干燥后浓缩，得14-2A-2粗品。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.24-8.56(m,1H),8.08(s,1H),4.35-4.28(t,J＝2.2Hz,2H),3.85-3.76(t,J＝5.6Hz,2H),2.70-2.62(m,2H)。
化合物14-2A
向14-2A-2(9.5克，46.11毫摩尔)的DCM(100mL)溶液中加入氯化亚砜(15.67克，131.74毫摩尔)，20℃搅拌1小时。0℃下，将反应混合物缓慢滴加到饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中，用DCM(100mL×2)萃取，合并后的萃取液用无水硫酸钠干燥后浓缩，得14-2A粗品。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ4.30-4.20(t,J＝2.6Hz,2H),3.92-3.85(t,J＝5.4Hz,2H),2.75-2.64(tt,J＝2.6,5.4Hz,2H)。
实施例1
Figure PCTCN2020133933-appb-000065
Figure PCTCN2020133933-appb-000066
化合物1-1
将1A-5(100毫克，186.59微摩尔)，1-1A(77毫克，377.38微摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(14毫克，19.13微摩尔)，和碳酸钠(40毫克，377.40微摩尔)置于DME(2mL)和水(0.2mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌16小时。将反应液过滤，滤液浓缩，经制备硅胶板(PE/EA＝5/1，V/V)分离，得粗品，再经色谱柱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物1-1。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.99-8.90(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.96-7.89(m,2H),7.67-7.58(dd,J＝2.0,8.6Hz,1H),7.49-7.40(d,J＝1.8Hz,1H),7.36-7.29(d,J＝8.4Hz,1H),6.76(s,1H),6.55-6.49(d,J＝0.8Hz,1H),4.74-4.68(t,J＝3.6Hz,1H),4.60-4.45(m,2H),4.09-4.02(m,2H),3.98-3.88(m,2H),3.89-3.76(ddd,J＝4.0,6.4,11.2Hz,1H),3.66-3.58(m,1H),3.57-3.44(m,2H),2.58-2.45(td,J＝5.2,13.8Hz,1H),2.27(s,3H),2.14-2.07(m,1H),1.89-1.81(m,2H),1.77-1.71(m,1H),1.68-1.61(m,2H),1.45-1.36(dd,J＝4.0,9.2Hz,1H),1.10-1.02(dd,J＝4.0,6.4Hz,1H),0.99-0.73(m,2H)。
化合物1
向1-1(54毫克，90.36微摩尔)的二氯甲烷(2mL)中加入三氟乙酸(616毫克，5.4毫摩尔)，反应液在25℃下搅拌0.5小时。将反应液用二氯甲烷(20mL)稀释，并用碳酸氢钠饱和水溶液调至中性。有机相用饱和食盐水(15×1mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经制备硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物1。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.99-8.90(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.96-7.85(m,2H),7.67-7.59(dd,J＝1.8,8.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.37-7.28(d,J＝8.6Hz,1H),6.84-6.78(d,J＝1.0Hz,1H),6.57-6.52(d,J＝1.0Hz,1H),4.53-4.46(m,2H),4.08-4.03(m,1H),4.00-3.94(m,3H),3.69-3.58(m,1H),3.54-3.36(ddd,J＝5.2,8.6,11.6Hz,1H),2.53-2.46(td,J＝5.0,14.0Hz,1H),2.28(s,3H),2.18-2.09(ddd,J＝5.4,8.4,13.8Hz,1H),1.79-1.72(m,1H),1.39-1.28(dd,J＝4.2,8.8Hz,1H),1.11-1.03(m,1H)。MS(ESI)m/z:514.2[M+H] +。
化合物1-2
向化合物1(25毫克，48.68微摩尔)和咪唑(8毫克，117.51微摩尔)的二氯甲烷(3mL)溶液中，加入TBSCl(10毫克，48.68微摩尔)。反应混合物25℃搅拌12小时。将反应混合物用二氯 甲烷(20mL)稀释并用水(30×1mL)和饱和食盐水(20×1mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，滤液浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物1-2。MS(ESI)m/z:628.3[M+H] +。
化合物1-2A和化合物1-2B
化合物1-2经SFC手性分离(手性柱REGIS(s,s)WHELK-O1(250mm*50mm,10μm)，流动相A：异丙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)得到化合物1-2A(保留时间3.846min)和化合物1-2B(保留时间3.966min)。化合物1-2A：MS(ESI)m/z:628.3[M+H] +，99.4％(ee％)；化合物1-2B：MS(ESI)m/z:628.3[M+H] +，94.3％(ee％)。
化合物1A
向1-2A(15毫克，23.89微摩尔)的THF(2mL)中加入TBAF(1M，0.048mL)，反应液在20℃下搅拌0.5小时。将反应液用滤液分别用乙酸乙酯(30mL)稀释，用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后，浓缩经制备硅胶板(PE/EA＝1/2，V/V)分离，得化合物1A。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.96-8.90(d,J＝5.0Hz,1H),8.15-8.11(m,1H),8.08(s,1H),7.98-7.94(m,1H),7.65-7.58(m,1H),7.55-7.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.36-7.25(d,J＝8.2Hz,1H),6.80(s,1H),6.58-6.50(d,J＝1.0Hz,1H),4.54-4.48(m,2H),4.09-4.01(m,1H),4.00-3.94(m,3H),3.67-3.62(m,1H),3.52-3.40(ddd,J＝5.0,8.4,11.6Hz,1H),2.50-2.40(td,J＝4.8,14.2Hz,1H),2.28(s,3H),2.20-2.10(ddd,J＝5.6,8.4,13.8Hz,1H),1.79-1.70(m,1H),1.37-1.34(m,1H),1.10-1.02(dd,J＝4.2,6.0Hz,1H)。MS(ESI)m/z:514.2[M+H] +。
化合物1B
向1-2B(11毫克，17.52微摩尔)的THF(2mL)中加入TBAF(1M，0.035mL)，反应液在20℃下搅拌0.5小时。将反应液用滤液分别用乙酸乙酯(30mL)稀释，用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后，浓缩经制备硅胶板(PE/EA＝1/2，V/V)分离，得化合物1B。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.96-8.90(d,J＝5.0Hz,1H),8.15-8.11(m,1H),7.97-7.89(m,2H),7.64-7.55(dd,J＝1.6,7.0Hz,1H),7.54-7.48(br d,J＝0.8Hz,1H),7.38-7.26(d,J＝8.6Hz,1H),6.84-6.78(d,J＝0.8Hz,1H),6.58-6.50(d,J＝1.2Hz,1H),4.54-4.47(m,2H),4.07-4.02(m,1H),4.00-3.93(m,3H),3.68-3.58(m,1H),3.53-3.44(m,1H),2.50-2.40(td,J＝5.3,13.6Hz,1H),2.28(s,3H),2.16-2.06(ddd,J＝5.6,8.7,14.1Hz,1H),1.78-1.71(m,1H),1.37-1.34(m,1H),1.12-1.05(m,1H)。MS(ESI)m/z:514.2[M+H] +。
实施例2
Figure PCTCN2020133933-appb-000067
化合物2-1
将1A-6(1.0克，2.35毫摩尔)，1-1A(480毫克，2.35毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(250毫克，341.67微摩尔)，和碳酸铯(1.6克，4.90毫摩尔)置于二氧六环(30mL)和水(5mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌16小时。将反应液用乙酸乙酯(30mL)稀释后过滤，滤液并用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝20/1至5/1，V/V)分离，得粗品，再经色谱柱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物2-1。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.99-8.92(d,J＝5.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.98-7.91(d,J＝4.4Hz,1H),7.89(s,1H),7.60-7.52(br d,J＝8.2Hz,1H),7.54(s,1H),7.38-7.30(d,J＝8.2Hz,1H),7.14-7.06(d,J＝3.8Hz,2H),4.09-4.01(m,1H),3.99-3.92(m,1H),3.69-3.58(td,J＝5.4,11.4Hz,1H),3.52-3.45(ddd,J＝5.4,8.6,11.4Hz,1H),2.56-2.48(td,J＝5.0,13.8Hz,1H),2.28(s,3H),2.22-2.10(ddd,J＝5.4,8.6,14.0Hz,1H),1.88-1.79(m,1H),1.45-1.36(dd,J＝4.2,9.2Hz,1H),1.18-1.10(dd,J＝4.2,6.4Hz,1H),0.87-0.82(m,1H)。
化合物2-2
向2-1(200毫克，409.92微摩尔)和2-1A-2(200毫克，1.06毫摩尔)的甲苯(5mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(37.54毫克，40.99微摩尔)，Ruphos(38.26毫克，81.98微摩尔)和碳酸铯(248.99毫克，764.19微摩尔)。反应混合物在氮气保护下，加热至120℃并搅拌4小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物2-2。MS(ESI)m/z:641.3[M+H] +。
化合物2
向2-2(80毫克，124.84微摩尔)的THF(5mL)中加入TBAF(1M，0.25mL)，反应液在20℃下搅拌0.5小时。将反应液过滤，滤液分别用柠檬酸溶液(1M，20×2mL)和饱和食盐水(15×1mL)洗涤，有机相浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝1/3，V/V)分离，得化合物2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.67(s,1H),9.07-9.96(d,J＝5.0Hz,1H),8.36(s,1H),8.24-8.16(d,J＝4.4Hz,1H),7.78-7.70(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.66-7.58(d,J＝2.2Hz,1H),7.36-7.25(d,J＝8.4Hz,1H),6.44(s,1H),6.29(s,1H),4.68-4.62(m,1H),3.98-3.88(dd,J＝4.8,11.4Hz,1H),3.85-3.74(d,J＝11.4Hz,1H),3.60-3.53(m,3H),3.52-3.45(m,1H),3.40-3.36(m,1H),3.30(s,2H),3.04(s,3H),2.23(s,3H),1.98-1.89(m, 1H),1.76-1.68(m,1H),1.30-1.21(dd,J＝3.2,9.2Hz,1H),0.99-0.90(dd,J＝3.6,5.8Hz,1H)。MS(ESI)m/z:527.2[M+H] +。
实施例3
Figure PCTCN2020133933-appb-000068
化合物3-1
向2-1(160毫克，329.27微摩尔)和3-1A(150毫克，855.46微摩尔)的甲苯(5mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(30.15毫克，32.93微摩尔)，Ruphos(30.73毫克，65.85微摩尔)和碳酸铯(200毫克，613.84微摩尔)。反应混合物在氮气保护下，加热至120℃并搅拌4小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物3-1。MS(ESI)m/z:627.2[M+H] +。
化合物3
向3-1(50毫克，79.77微摩尔)的THF(5mL)中加入TBAF(1M，0.16mL)，反应液在20℃下搅拌0.5小时。将反应液过滤，滤液分别用柠檬酸溶液(1M，15×2mL)和饱和食盐水(15×1mL)洗涤，有机相浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝1/5，V/V)分离，得化合物3。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.66(s,1H),9.05-9.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.36(s,1H),8.24-8.16(d,J＝4.8Hz,1H),7.80-7.68(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.65-7.59(d,J＝2.2Hz,1H),7.36-7.27(d,J＝8.4Hz,1H),6.52-6.46(t,J＝5.6Hz,1H),6.38(s,1H),6.25-6.18(d,J＝0.6Hz,1H),4.73-4.65(t,J＝5.4Hz,1H),3.98-3.90(dd,J＝5.0,11.4Hz,1H),3.86-3.74(d,J＝11.4Hz,1H),3.58-3.50(q,J＝5.8Hz,2H),3.50-3.43(m,1H),3.40-3.36(m,1H),3.30(s,2H),2.47-2.42(m,1H),2.22(s,3H),1.99-1.86(ddd,J＝5.0,8.2,13.6Hz,1H),1.74-1.67(m,1H),1.30-1.21(dd,J＝3.2,9.2Hz,1H),0.99-0.90(dd,J＝3.6,6.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:513.2[M+H] +。
实施例4
Figure PCTCN2020133933-appb-000069
化合物4-1
将1A-8(460毫克，1.08毫摩尔)，1-1A(405毫克，1.19毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(79毫克，107.97微摩尔)，和碳酸铯(706毫克，2.17毫摩尔)置于DME(8mL)和水(2mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌24小时。将反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后过滤，滤液并用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝5/1至2/1，V/V)分离，得化合物4-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.65(d,J＝2.6Hz,1H),8.20(d,J＝2.6Hz,1H),8.16(s,1H),8.10(d,J＝8.2Hz,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.69(s,1H),7.12(d,J＝2.0Hz,2H),4.08-3.95(m,2H),3.69-3.62(m,1H),3.49(ddd,J＝11.6,8.8,5.2Hz,1H),2.51(s,3H),2.21-2.12(m,1H),1.90-1.82(m,1H),1.40(dd,J＝9.2,4.0Hz,1H),1.15(dd,J＝4.4,2.0Hz,1H),0.92(dd,J＝12.6,5.6Hz,1H)。
化合物4-2
向4-1(280毫克，573.89微摩尔)和1A-2(126毫克，861.93微摩尔)的甲苯(5mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(53毫克，57.88微摩尔)，Brettphos(31毫克，57.75微摩尔)和碳酸铯(374毫克，1.15毫摩尔)。将反应液用乙酸乙酯(10mL)稀释后过滤，滤液并用水(20×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝40/1至5/1，V/V)分离，得化合物4-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ,8.66(d,J＝2.6Hz,1H),8.16(s,2H),8.10(d,J＝2.6Hz,1H),7.91(s,1H),7.86(br d,J＝7.6Hz,1H),7.66-7.70(m,1H),6.79(d,J＝1.0Hz,1H),6.55(d,J＝1.0Hz,1H),4.72(d,J＝3.8Hz,1H),4.60-4.54(m,2H),4.04-4.09(m,2H),3.93-3.97(m,2H),3.82(s,1H),3.76(s,1H),3.58-3.52(m,2H),2.80(br d,J＝6.4Hz,1H),2.51(s,3H),2.14-2.08(m,1H),1.90-1.80(m,4H),1.80-1.74(m,2H),1.62(br d,J＝4.2Hz,1H),1.39(d,J＝3.8Hz,1H),1.07(dd,J＝6.2,4.0Hz,1H)。
化合物4
向4-2(220毫克，638.13微摩尔)的DMF(2mL)中加入HCl(2M，2.2mL)，反应液在15℃下搅拌0.5小时。将反应液中加入NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，再用水(20mL)稀释后用乙酸乙酯(20×2mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥后浓缩，经制备硅胶板(DCM/MeOH＝20/1，V/V)分离，得化合物4。 1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.88-8.80(d,J＝2.4Hz,1H),8.30(s,1H),8.26-8.19(d,J＝7.6Hz,1H),8.15-8.09(d,J＝2.4Hz,1H),7.99-7.91(d,J＝7.4Hz,1H),7.72-7.78(m,1H),6.96-6.89(d,J＝1.0Hz,1H),6.65-6.60(d,J＝1.0Hz,1H),4.40-4.44(m,2H),4.10-4.02(dd,J＝11.4,4.6Hz,1H),3.97- 3.90(d,J＝11.4Hz,1H),3.91-3.88(m,2H),3.68-3.60(m,1H),3.54-3.46(m,2H),2.60-2.51(br d,J＝14.0Hz,1H),2.47(s,3H),2.10(s,1H),1.88-1.80(m,1H),1.46-1.40(dd,J＝9.0,4.2Hz,1H),1.34-1.28(br s,1H),1.10-1.01(dd,J＝6.4,4.0Hz,1H)。MS(ESI)m/z:514.2[M+H] +。
实施例5
Figure PCTCN2020133933-appb-000070
化合物5-1
将1A-3(2克，5.21毫摩尔)，5-1A(1.51克，5.74毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(190.74毫克，260.68微摩尔)，和碳酸钠(1.38克，13.03毫摩尔)置于二氧六环(20mL)和水(4mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌1.5小时。将反应液用乙酸乙酯(30mL)稀释后过滤，滤液并用水(20×3mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝100/1至50/1，V/V)分离，得化合物5-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.17(dd,J＝2.6 8.4Hz,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(d,J＝1.2Hz,1H),6.67(d,J＝1.2Hz,1H),4.74-4.69(m,1H),4.57(ddd,J＝3.4,6.0,9.2Hz,2H),4.08(ddd,J＝3.4,5.8,11.4Hz,1H),3.96-3.78(m,2H),3.60-3.50(m,1H),2.38(s,3H),1.94-1.80(m,1H),1.79-1.70(m,1H),1.69-1.53(m,4H)。
化合物5-2
将5-1(200毫克，509.12微摩尔)，1-1A(190毫克，558.72微摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(38毫克，51.93微摩尔)，和碳酸铯(333毫克，1.02毫摩尔)置于DME(4mL)和水(1mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌24小时。将反应液用乙酸乙酯(10mL)稀释后过滤，滤液并用水(10×2mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝3/1，V/V)分离，得化合物5-2。MS(ESI)m/z:455.2[M+H] +。
化合物5-3
向5-2(120毫克，264.02微摩尔)的甲醇(4mL)溶液中，加入Pd/C(10％，15毫克)，在氢气(15psi)氛围下，25℃下搅拌1小时。将反应液过滤后，浓缩得化合物5-3粗品。MS(ESI):m/z447.2[M+Na+H] +。
化合物5-4
向5-2A(60毫克，346.59微摩尔)，5-3(120毫克，282.66微摩尔)的DCM(5mL)中，加入HATU(120毫克，315.59微摩尔)和DIPEA(92毫克，711.83微摩尔)，20℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，并用DCM(20×2mL)萃取，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥浓缩后，经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)纯化，得化合物5-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ,8.89-8.80(d,J＝5.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.96(s,1H),7.82-7.76(br d,J＝5.4Hz,1H),7.59-7.64(m,1H),7.50-7.42(d,J＝1.8Hz,1H),7.38-7.29(d,J＝8.2Hz,1H),6.58-6.88(m,2H),6.56-6.50(d,J＝0.8Hz,1H),4.71(t,J＝3.6Hz,1H),4.45-4.58(m,2H),4.01-4.15(m,2H),3.88-3.99(m,2H),3.82(ddd,J＝11.0,6.8,3.8Hz,1H),3.58-3.67(m,1H),3.43-3.56(m,2H),2.55(dt,J＝13.8,5.2Hz,1H),2.03-2.14(m,1H),2.27(s,3H),1.79-1.90(m,2H),1.70-1.77(m,1H),1.60-1.69(m,2H),1.53(br d,J＝9.2Hz,2H),1.39(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H),1.05(dd,J＝6.2,4.0Hz,1H)。
化合物5
向5-4(100毫克，172.52微摩尔)的DMF(2mL)中加入HCl(4M，2mL)，反应液在15℃下搅拌0.5小时。将反应液中加入NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，再用水(20mL)稀释后用乙酸乙酯(20×2mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物5。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.89-8.80(d,J＝5.0Hz,1H),8.18(s,1H),8.06-7.95(d,J＝4.6Hz,1H),7.69-7.60(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.65-7.58(d,J＝2.2Hz,1H),7.38-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.66-7.00(m,2H),6.58-6.50(d,J＝1.0Hz,1H),4.36-4.44(m,2H),4.08-4.01(dd,J＝11.4,4.6Hz,1H),3.96-3.91(d,J＝1.2Hz,1H),3.86-3.91(m,2H),3.57-3.65(m,1H),3.52-3.46(ddd,J＝11.60,8.4,5.2Hz,2H),2.26(s,3H),2.51-2.62(m,1H),2.03-2.15(m,1H),1.76-1.90(m,1H),1.45-1.38(dd,J＝9.2,3.8Hz,1H),1.10-1.01(dd,J＝6.2,4.0Hz,1H)。MS(ESI)m/z:496.1[M+H] +。
实施例6
Figure PCTCN2020133933-appb-000071
化合物6-2
向6-1(250毫克，1.34毫摩尔)，6-1A(274毫克，1.47毫摩尔)的DCM(5mL)中，加入HATU(610毫克，1.60毫摩尔)和DIPEA(208毫克，1.61毫摩尔)，20℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，并用DCM(15×2mL)萃取，将有机相合并后用无水硫酸钠干燥浓缩后，经制备硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)纯化，得化合物6-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.83(d,J＝5.0Hz,1H),8.01(d,J＝0.8Hz,1H),7.91(d,J＝2.0Hz,1H),7.87-7.79(m,2H),7.49(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),7.25(d,J＝8.2Hz,1H),2.40(s,3H),2.07(t,J＝18.8Hz,3H)。
化合物6-3
将6-2(370毫克，1.04毫摩尔)，2-1A-1(317毫克，1.25毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(39毫克，53.30微摩尔)和醋酸钾(205毫克，2.09毫摩尔)置于DME(6mL)中。反应混合物在氮气保护 下，加热至90℃并搅拌12小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，有机相用水(20×1mL)和无饱和食盐水(20×1mL)洗涤，浓缩后得化合物6-3。MS(ESI):m/z 403.2[M+H] +。
化合物6-4
将6-3(600毫克，1.49毫摩尔)，1-1A(450毫克，1.64毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(55毫克，75.17微摩尔)和碳酸钠(317毫克，2.99毫摩尔)置于DME(8mL)和H 2O(2mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至85℃并搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相用水(30×1mL)和无饱和食盐水(30×1mL)洗涤，浓缩后得化合物6-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.86-8.81(d,J＝5.0Hz,1H),8.13-7.99(m,2H),7.87-7.79(d,J＝5.0Hz,1H),7.65-7.42(m,3H),7.41-7.38(d,J＝8.2Hz,1H),2.29(s,3H),2.07-1.98(m,3H)。
化合物6-5
将6-4(360毫克，852.57微摩尔)，1-1A(319毫克，938.06微摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(63毫克，86.10微摩尔)，和碳酸铯(556毫克，1.71毫摩尔)置于DME(6mL)和水(1mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌14小时。将反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释后过滤，滤液并用水(30×1mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物6-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.84(d,J＝5.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.92(s,1H),7.83(d,J＝4.4Hz,1H),7.62-7.53(m,2H),7.33(d,J＝8.2Hz,1H),7.09(d,J＝3.6Hz,2H),4.08-4.00(m,1H),4.00-3.89(m,1H),3.70-3.61(m,1H),3.48(ddd,J＝5.2,8.8,11.8Hz,1H),2.52(td,J＝4.8,13.8Hz,1H),2.27(s,3H),2.18-2.13(m,1H),2.07-2.02(m,3H),1.87-1.79(m,1H),1.38(dd,J＝4.2,9.2Hz,1H),1.13(dd,J＝4.2,6.4Hz,1H)。
化合物6-6
向6-5(160毫克，330.62微摩尔)和1A-2(73毫克，499.37微摩尔)的甲苯(4mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(31毫克，33.85微摩尔)，Brettphos(36毫克，67.07微摩尔)和碳酸铯(216毫克，662.94微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯(30mL)稀释后过滤，滤液并用水(20×1mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物6-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.83(d,J＝4.6Hz,1H),8.03(s,1H),7.93(s,1H),7.83(d,J＝4.6Hz,1H),7.62(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),7.49-7.45(m,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.76(d,J＝1.0Hz,1H),6.51(d,J＝1.0Hz,1H),4.75-4.68(m,1H),4.59-4.47(m,2H),4.09-4.01(m,2H),3.99-3.88(m,2H),3.82(ddd,J＝4.0,6.6,11.0Hz,1H),3.65-3.59(m,1H),3.57-3.44(m,2H),2.55(td,J＝5.0,14.2Hz,1H),2.27(s,3H),2.07-2.02(m,3H),1.89-1.71(m,3H),1.68-1.60(m,2H),1.58-1.47(m,3H),1.39(dd,J＝4.0,9.0Hz,1H),1.05(dd,J＝4.0,6.2Hz,1H)。
化合物6
向6-6(150毫克，252.67微摩尔)的DMF(2mL)中加入HCl(4M，0.5mL)，反应液在20℃下搅拌2小时。将反应液中加入NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(20×1mL)萃取，有机相浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/2，V/V)分离，得化合物6。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.85-8.79 (d,J＝5.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.98-7.90(d,J＝4.6Hz,1H),7.69-7.60(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.60-7.54(d,J＝2.2Hz,1H),7.35-7.28(d,J＝8.2Hz,1H),6.89-6.84(m,1H),6.58-6.51(d,J＝1.0Hz,1H),4.44-4.35(m,2H),4.08-3.99(dd,J＝4.6,11.2Hz,1H),3.95-3.85(m,3H),3.65-3.57(m,1H),3.54-3.44(m,1H),2.61-2.51(m,1H),2.25(s,3H),2.09-1.97(m,4H),1.84-1.76(m,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.4,9.2Hz,1H),1.06-1.01(dd,J＝3.8,6.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:510.3[M+H] +。
化合物6-7
向化合物6(150毫克，294.38微摩尔)和咪唑(41毫克，602.23微摩尔)的DMF(3mL)溶液中，加入TBSCl(67毫克，444.53微摩尔)。反应混合物35℃搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释并用水(15×1mL)和饱和食盐水(15×3mL)洗涤，有机相浓缩后经制备硅胶板(PE/EA＝3/1，V/V)分离，得化合物6-7。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.83(d,J＝5.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝5.0Hz,1H),7.62(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),7.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),6.76(s,1H),6.48(s,1H),4.41(t,J＝5.4Hz,2H),4.08-4.02(m,1H),3.99-3.97(m,2H),3.78-3.74(m,1H),3.62(td,J＝5.4,11.2Hz,1H),3.48(ddd,J＝5.2,8.4,11.6Hz,1H),2.55(td,J＝5.2,14.0Hz,1H),2.27(s,3H),2.08-2.02(m,3H),1.89-1.82(m,2H),1.38(dd,J＝3.8,9.0Hz,1H),1.05(dd,J＝3.8,6.0Hz,1H),0.91(s,9H),0.09(s,6H)。
化合物6-7A和化合物6-7B
化合物6-7经SFC手性分离(手性柱REGIS(R,R)WHELK-O1(250mm*25mm,10μm)，流动相A：异丙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)得到化合物6-7A(保留时间2.263min)和化合物6-7B(保留时间2.325min)。
化合物6A
向6-7A(55毫克，88.17微摩尔)的THF(2mL)中加入HCl(3M，0.78mL)，反应液在25℃下搅拌1小时。将反应液用饱和NaHCO 3中和后，用乙酸乙酯(15×2mL)萃取，有机相用饱和食盐水(30×1mL)洗涤，有机相浓缩经制备硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物6A。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.85-8.79(d,J＝5.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.98-7.90(d,J＝4.6Hz,1H),7.69-7.60(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.60-7.54(d,J＝2.2Hz,1H),7.35-7.28(d,J＝8.2Hz,1H),6.89-6.84(m,1H),6.58-6.51(d,J＝1.0Hz,1H),4.44-4.35(m,2H),4.08-3.99(dd,J＝4.6,11.2Hz,1H),3.95-3.85(m,3H),3.65-3.57(m,1H),3.54-3.44(m,1H),2.61-2.51(m,1H),2.25(s,3H),2.09-1.97(m,4H),1.84-1.76(m,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.4,9.2Hz,1H),1.06-1.01(dd,J＝3.8,6.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:510.3[M+H] +，100％(ee％)。
化合物6B
向6-7B(52毫克，83.36微摩尔)的THF(2mL)中加入HCl(3M，0.74mL)，反应液在25℃下搅拌1小时。将反应液用饱和NaHCO 3中和后，用乙酸乙酯(10×2mL)萃取，有机相用饱和食盐水(20×1mL)洗涤，有机相浓缩经制备硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物6B。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.85-8.79(d,J＝5.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.98-7.90(d,J＝4.6Hz,1H),7.69-7.60 (dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.60-7.54(d,J＝2.2Hz,1H),7.35-7.28(d,J＝8.2Hz,1H),6.89-6.84(m,1H),6.58-6.51(d,J＝1.0Hz,1H),4.44-4.35(m,2H),4.08-3.99(dd,J＝4.6,11.2Hz,1H),3.95-3.85(m,3H),3.65-3.57(m,1H),3.54-3.44(m,1H),2.61-2.51(m,1H),2.25(s,3H),2.09-1.97(m,4H),1.84-1.76(m,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.4,9.2Hz,1H),1.06-1.01(dd,J＝3.8,6.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:510.3[M+H] +，100％(ee％)。
实施例7
Figure PCTCN2020133933-appb-000072
化合物7-1
向2-1(80毫克，163.97微摩尔)和7-1A(25毫克，208.04微摩尔)的二氧六环(2mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(16毫克，17.47微摩尔)，Brettphos(10毫克，17.28微摩尔)和DIPEA(44毫克，340.45微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌12小时。将反应液浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物7-1。MS(ESI)m/z:572.3[M+H] +。
化合物7
向7-1(85毫克，148.70微摩尔)的THF(3mL)中加入氢化铝锂(9毫克，237.13微摩尔)，反应液在0℃下搅拌15分钟。0℃下，向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(15×2mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱色谱分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物7。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.94-8.90(br d,J＝4.8Hz,1H),8.25(br s,1H),8.13(s,1H),7.98-7.91(br d,J＝4.0Hz,1H),7.64-7.60(br d,J＝7.8Hz,1H),7.48(br s,1H),7.34-7.27(br d,J＝8.2Hz,1H),7.04(s,1H),6.91(s,1H),4.58-4.28(m,1H),4.11-3.88(m,4H),3.71-3.57(m,1H),3.55-3.30(m,3H),2.44-2.34(m,1H),2.26(s,3H),2.19-2.06(m,1H),1.74-1.69(br d,J＝4.4Hz,1H),1.37-1.24(m,1H),1.10-1.01(br t,J＝5.0Hz,1H)。MS(ESI)m/z:530.0[M+H] +。
实施例8
Figure PCTCN2020133933-appb-000073
化合物8-1
将1A-3(500毫克，1.30毫摩尔)，1-1A(450毫克，1.32毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(200毫克，273.33微摩尔)和碳酸铯(860毫克，2.64毫摩尔)置于DME(12mL)和H 2O(2mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌12小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)和水(15×1mL)稀释，用乙酸乙酯(20×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱色谱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物8-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ6.68(d,J＝1.2Hz,1H),6.47(d,J＝1.2Hz,1H),4.62(t,J＝3.6Hz,1H),4.40(ddq,J＝3.4,6.2,11.6Hz,2H),3.99-3.78(m,5H),3.71(ddd,J＝3.4,6.2,11.6Hz,1H),3.54(td,J＝5.2,11.6Hz,1H),3.45(td,J＝5.2,11.0Hz,1H),3.33(ddd,J＝5.8,8.4,11.6Hz,1H),2.05-1.97(m,2H),1.82-1.61(m,2H),1.60-1.50(m,2H),1.45(br d,J＝5.4Hz,1H),1.32-1.23(m,1H),1.04-0.92(m,2H)。
化合物8-2
将8-1(50毫克，141.31微摩尔)，1A-4(80毫克，196.94微摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(15毫克，20.50微摩尔)，和碳酸钠(30毫克，283.05微摩尔)置于二氧六环(2mL)和水(0.4mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌4小时。将反应液用乙酸乙酯(10mL)和水(15mL)稀释后过滤，滤液并用乙酸乙酯(10×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物8-2。MS(ESI)m/z:598.4[M+H] +。
化合物8
向8-2(50毫克，83.66微摩尔)的DMF(2mL)中加入HCl(4M，1mL)，反应液在15℃下搅拌0.5小时。将反应液用乙酸乙酯(10mL)和水(15mL)稀释后，用NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(10×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物8。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.97-8.92(d,J＝5.0Hz,1H),8.33(s,1H),8.18-8.11(d,J＝4.0Hz,1H),7.83-7.75(m,1H),7.73-7.68(dd,J＝2.2,8.2Hz,1H),7.36-7.29(d,J＝8.2Hz,1H),7.05-6.95(d,J＝1.4Hz,1H),6.75-6.70(d,J＝1.4Hz,1H),4.43-4.38(m,2H),4.10-4.02(dd,J＝4.6,11.4Hz,1H),3.97-3.90(d,J＝11.4Hz,1H),3.91-3.86(m,2H),3.67-3.59(m,1H),3.56-3.49(ddd,J＝5.6,8.2,11.6Hz,1H),2.39(s,3H),2.25-2.14(m,2H),1.56-1.51(td,J＝4.6,9.2Hz,1H),1.22-1.15(m,1H),1.10-1.05(m,1H),1.10-1.05(m,1H)。MS(ESI)m/z:514.3[M+H] +。
实施例9
Figure PCTCN2020133933-appb-000074
化合物9-1
向2-1(150毫克，307.44微摩尔)和9-1A(82毫克，620.47微摩尔)的甲苯(4mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(28毫克，30.58微摩尔)，Brettphos(33毫克，61.48微摩尔)和碳酸铯(201毫克，616.91微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌4小时。将反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释，用水(20×1mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物9-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.93(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.94-7.85(m,2H),7.59(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),7.47(d,J＝1.8Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.78(s,1H),6.52(d,J＝1.0Hz,1H),4.56-4.47(m,1H),4.45-4.32(m,2H),4.20-4.16(m,1H),4.08-4.02(m,1H),3.99-3.93(m,1H),3.89(ddd,J＝1.2,6.2,8.4Hz,1H),3.62(td,J＝5.4,11.2Hz,1H),3.48(ddd,J＝5.2,8.4,11.6Hz,1H),2.54(td,J＝5.2,12.4Hz,1H),2.27(s,3H),2.15-2.06(m,1H),1.87-1.77(m,1H),1.49(s,3H),1.42(s,3H),1.40-1.35(m,1H),1.07(dd,J＝3.8,6.2Hz,1H)。
化合物9
向9-1(140毫克，239.89微摩尔)的甲醇(3mL)中加入HCl(3M，0.2mL)，反应液在30℃下搅拌1小时。将反应液用水(20mL)稀释后，用NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(20×1mL)萃取，有机相浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离，得化合物9。 1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.96-8.89(d,J＝5.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.16-8.11(dd,J＝1.4,5.0Hz,1H),7.71-7.65(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.65-7.59(d,J＝2.4Hz,1H),7.36-7.30(d,J＝8.2Hz,1H),6.91-6.87(d,J＝1.0Hz,1H),6.60-6.54(d,J＝1.0Hz,1H),4.49-4.40(m,1H),4.38-4.30(m,1H),4.10-3.99(m,2H),3.96-3.90(dd,J＝1.2,11.2Hz,1H),3.69-3.56(m,3H),3.54-3.38(ddd,J＝5.2,8.4,11.6Hz,1H),2.60-2.53(td,J＝5.2,14.0Hz,1H),2.27(s,3H),2.15-2.04(m,1H),1.90-1.76(m,1H),1.48-1.36(m,1H),1.09-1.01(dd,J＝4.0,6.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:544.2[M+H] +。
实施例10
Figure PCTCN2020133933-appb-000075
化合物10
向2-1(140毫克，286.94微摩尔)和10-1A(46毫克，433.47微摩尔)的甲苯(4mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(27毫克，29.48微摩尔)，Brettphos(31毫克，57.75微摩尔)和碳酸铯(187毫克，573.94微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌4小时。将反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后用水(20×1mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝2/1，V/V)分离，得化合物10。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.69(s,1H),9.01-8.97(d,J＝5.0Hz,1H),8.36(s,1H),8.23-8.18(dd,J＝1.0,5.0Hz,1H),7.77-7.73(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.69-7.65(d,J＝2.2Hz,1H),7.37-7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.89-6.85(d,J＝1.0Hz,1H),6.55-6.51(d,J＝1.0Hz,1H),5.08-5.01(d,J＝5.4Hz,1H),4.32-4.23(m,1H),4.22-4.14(m,1H),4.00-3.92(m,2H),3.83-3.77(dd,J＝1.2,11.4Hz,1H),3.54-3.46(m,1H),3.45-3.35(m,3H),3.28(s,3H),2.55-2.51(br d,J＝2.0Hz,1H),2.24(s,3H),2.06-1.93(m,1H),1.84-1.73(m,1H),1.36-1.30(td,J＝3.0,9.0Hz,1H),1.05-0.98(dd,J＝3.6,6.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:558.0[M+H] +。
实施例11
Figure PCTCN2020133933-appb-000076
Figure PCTCN2020133933-appb-000077
化合物11-2
将11-1(7.5克，50.68毫摩尔)，11-1A(10.1克，48.15毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(4.1克，5.07毫摩尔)，和碳酸钠(10.7克，101.36毫摩尔)置于DME(225mL)和水(50mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至90℃并搅拌12小时。将反应液浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝1/0至0/1，V/V)分离，得化合物11-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.56-7.52(m,1H),7.20-7.18(m,1H),7.12-7.03(m,1H),6.72-6.70(m,1H),4.31–4.29(m,2H),3.87–3.85(m,2H),2.54–2.51(m,2H)。
化合物11-3
将11-2(1.8克，9.20毫摩尔)，11-2A(4.6克，32.11毫摩尔)，碘化钠(450毫克，3.00毫摩尔)置于THF(42mL)溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至80℃并搅拌12小时。向反应液中加入二氯甲烷(20mL)和水(20mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物11-3。MS(ESI)m/z:246.2[M+H] +。
化合物11-4
向11-3(2克，8.14毫摩尔)的二氯甲烷(20mL)溶剂中加入间氯过氧苯甲酸(4.1克，20.27毫摩尔，85％)。将反应混合物加热至65℃并搅拌12小时。向反应液中加入硫代硫酸钠(20克)、水(200mL)和二氯甲烷(200mL)，搅拌30分钟。加入碳酸钠(15克)搅拌20分钟。分液，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝1/0至1/1，V/V)分离，得化合物11-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.51-7.49(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.20-7.16(m,1H),4.23–4.21(m,1H),4.13–4.08(m,1H),3.82–3.80(m,2H),2.30-2.25(m,1H),1.77–1.67(m,2H)。
化合物11-5
将11-4(100毫克，382.19微摩尔)置于三氯氧磷(2mL)中，加热至90℃并搅拌12小时。将反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用乙酸乙酯(20×1mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物11-5。MS(ESI)m/z:280.1[M+H] +。
化合物11-6
向11-5(100毫克，357.02微摩尔)和11-3A(125.9毫克，714.04微摩尔)的THF(1mL)溶剂中加入叔丁醇钾(1.8mL，1M)。将反应混合物在25℃并搅拌3小时。向反应液中加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝5/1，V/V)分离，得化合物11-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ6.89(d,J＝1.4Hz,1H),6.67(d,J＝1.4Hz,1H),4.38(t,J＝5.2Hz,2H),4.18-4.01(m,2H),3.94(t,J＝5.2Hz,2H),3.67-3.47(m,2H),2.57-2.48(m,1H),2.41-2.27(m,1H),2.21-2.09(m,1H),0.93-0.88(m,1H),0.91(s,8H),0.15-0.05(m,6H)。
化合物11-7
将11-6(100毫克，238.12微摩尔)，1A-4(116毫克，285.74微摩尔)，Pd(dppf)Cl2(38.9毫克，47.62微摩尔)，和碳酸钠(50.5毫克，476.23微摩尔)置于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至90℃并搅拌3小时。将反应液浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝3/1，V/V)分离后，又经色谱柱(硅胶)分离(NH4HCO3-MeCN-H2O)，得化合物11-7。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.94(d,J＝4.8Hz,1H),8.11(s,1H),7.93(d,J＝4.6Hz,1H),7.83(s,1H),7.63(br d,J＝8.6Hz,1H),7.47(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(s,1H),6.62(d,J＝1.0Hz,1H),4.45(t,J＝5.2Hz,2H),4.20-4.04(m,2H),3.99(t,J＝5.2Hz,2H),3.68-3.49(m,2H),2.59(ddd,J＝3.2,6.4,9.8Hz,1H),2.43-2.32(m,1H),2.27(s,3H),2.26-2.17(m,1H),1.56(s,4H),0.91(s,9H),0.10(s,6H)。
化合物11
向11-7(120毫克，180.79微摩尔)的THF(3mL)中加入HCl(12M，0.03mL)，反应液在20℃下搅拌3小时。将反应液用水(10mL)稀释后，用NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(10×1mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物11。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.97-8.92(d,J＝4.8Hz,1H),8.11(s,1H),7.95-7.90(br d,J＝4.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.64-7.58(br d,J＝8.0Hz,1H),7.52(s,1H),7.36-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.68(s,1H),4.59-4.50(m,2H),4.17-3.97(m,4H),3.67-3.49(m,2H),3.27-3.23(t,J＝5.8Hz,1H),2.53-2.42(m,1H),2.41-2.30(m,1H),2.28(s,3H),2.23-2.11(m,1H)。MS(ESI)m/z:550.3[M+H] +。
化合物11A和化合物11B
化合物11经SFC分离(手性柱DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5μm)，流动相A：乙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)得到化合物11A(保留时间1.325min)和化合物11B(保留时间1.422min)。化合物11A： 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.97-8.92(d,J＝4.8Hz,1H),8.11(s,1H),7.95-7.90(br d,J＝4.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.64-7.58(br d,J＝8.0Hz,1H),7.52(s,1H),7.36-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.68(s,1H),4.59-4.50(m,2H),4.17-3.97(m,4H),3.67-3.49(m,2H),3.27-3.23(t,J＝5.8Hz,1H),2.53-2.42(m,1H),2.41-2.30(m,1H),2.28(s,3H),2.23-2.11(m,1H)。MS(ESI)m/z:550.0[M+H] +，100％(ee％)。化合物11B： 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.97-8.92(d,J＝4.8Hz,1H),8.11(s,1H),7.95-7.90(br d,J＝4.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.64-7.58(br d,J＝8.0Hz,1H),7.52(s,1H),7.36-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.68(s,1H),4.59-4.50(m,2H),4.17-3.97(m,4H),3.67-3.49(m,2H),3.27-3.23(t,J＝5.8Hz,1H),2.53-2.42(m,1H),2.41-2.30(m,1H),2.28(s,3H),2.23-2.11(m,1H)。MS(ESI)m/z:550.0[M+H] +，97.5％(ee％)。
实施例12
Figure PCTCN2020133933-appb-000078
Figure PCTCN2020133933-appb-000079
化合物12-2
将12-1(480毫克，2.46毫摩尔)，1A-4(1克，2.46毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(400毫克，489.81微摩尔)，和碳酸钠(520毫克，4.91毫摩尔)置于二氧六环(20mL)和水(4mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌2小时。将反应液过滤，滤液浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝10/1至5/1，V/V)分离，得化合物12-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.92(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,2H),7.93(d,J＝4.2Hz,1H),7.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.66(dd,J＝2.2,8.2Hz,1H),7.32(d,J＝8.2Hz,1H),7.14(s,1H),2.61(s,3H),2.44(s,3H)。
化合物12-3
将12-2(300毫克，683.60微摩尔)，1-1A(156毫克，764.56微摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(120毫克，146.94微摩尔)和碳酸铯(450毫克，1.38毫摩尔)置于DME(10mL)和H 2O(2mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至110℃并搅拌16小时。将反应液过滤，滤液浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝10/1至5/1，V/V)分离，得化合物12-2。MS(ESI)m/z:501.2[M+H] +。
化合物12-4
向12-3(80毫克，159.83微摩尔)的二氯甲烷(2mL)溶剂中加入间氯过氧苯甲酸(65毫克，320.17微摩尔，85％)。将反应混合物在15℃并搅拌1小时。向反应液中加入水(2mL)和二氯甲烷(3mL)，分液，有机相用饱和亚硫酸钠(1mL)洗涤，有机相浓缩，得化合物12-4。MS(ESI)m/z:533.3[M+H] +。
化合物12-5
向1A-2(16毫克，109.45微摩尔)的二氧六环(2mL)溶液中加入氢化钠(16毫克，400.04微摩尔，60％)。将12-4(55毫克，103.28微摩尔)加入上述混合物中，并在15℃并搅拌1小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(3mL)，用乙酸乙酯(5×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物12-5。MS(ESI)m/z:599.4[M+H] +。
化合物12
向12-5(50毫克，83.53微摩尔)的DMF(2mL)中加入HCl(2M，0.15mL)，反应液在15℃ 下搅拌1小时。向反应液中加入NaHCO 3饱和溶液(5mL)，用乙酸乙酯(5×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经色谱柱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物12。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.80(s,1H),9.02-8.97(d,J＝5.0Hz,1H),8.39(s,1H),8.24-8.20(d,J＝4.4Hz,1H),7.89-7.86(d,J＝2.0Hz,1H),7.87-7.83(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.39-7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.17(s,1H),4.91(br s,1H),4.36-4.31(t,J＝5.2Hz,2H),3.96-3.88(m,1H),3.87-3.81(m,1H),3.75-3.70(br t,J＝4.8Hz,2H),3.60-3.52(m,1H),2.64-2.58(td,J＝4.8,14.0Hz,1H),2.38(s,3H),1.99-1.89(ddd,J＝5.8,8.6,14.2Hz,1H),1.88-1.80(m,1H),1.49-1.40(dd,J＝3.8,9.2Hz,1H),1.16-1.10(dd,J＝3.8,6.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:515.1[M+H] +。
实施例13
Figure PCTCN2020133933-appb-000080
化合物13-1
向2-1(100毫克，204.96微摩尔)和13-1A(100毫克，533.75微摩尔)的甲苯(4mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(30毫克，32.76微摩尔)，Ruphos(30毫克，64.29微摩尔)和碳酸铯(150毫克，460.38微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至120℃并搅拌4小时。将反应液过滤，滤液浓缩后经薄层硅胶板(PE/EA＝3/1，V/V)分离，得化合物13-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.93(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.92(br d,J＝4.6Hz,1H),7.85(s,1H),7.62(br d,J＝8.4Hz,1H),7.42(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.51(s,1H),6.03(s,1H),4.76(quin,J＝5.6Hz,1H),4.22(t,J＝7.6Hz,2H),4.06-3.99(m,1H),3.98-3.93(m,1H),3.84-3.77(m,2H),3.62(td,J＝5.4,11.2Hz,1H),3.45(ddd,J＝5.4,8.8,11.2Hz,1H),2.57(td,J＝4.8,14.0Hz,1H),2.10-2.03(m,1H),1.81(td,J＝4.6,9.2Hz,1H),1.37(dd,J＝3.8,9.2Hz,1H),0.99(dd,J＝3.8,6.4Hz,2H),0.93-0.90(m,9H),0.11-0.07(m,6H)。
化合物13
向13-1(80毫克，125.24微摩尔)的二氯甲烷(4mL)中加入TFA(1mL)，反应液在15℃下搅拌13小时。将反应液用二氯甲烷(10mL)稀释后，用NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用二氯甲烷(10×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经色谱柱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物13。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.69(s,1H),9.02-8.97(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.22-8.18(d,J＝5.0Hz,1H),7.77-7.73(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),7.64-7.61(d,J＝2.0Hz,1H),7.35-7.30(d, J＝8.4Hz,1H),6.54(s,1H),6.12(br s,1H),5.77-5.36(m,1H),4.64-4.50(m,1H),4.18-4.14(br t,J＝7.2Hz,2H),3.96-3.92(dd,J＝4.6,11.2Hz,1H),3.83-3.79(d,J＝10.2Hz,1H),3.75-3.61(m,2H),3.51-3.47(td,J＝5.6,11.4Hz,1H),3.42-3.37(m,2H),2.23(s,3H),1.98-1.94(ddd,J＝5.6,8.2,13.8Hz,1H),1.77-1.70(m,1H),1.29-1.27(dd,J＝3.6,9.0Hz,1H),0.95-0.90(dd,J＝3.6,6.0Hz,1H)。MS(ESI)m/z:525.2[M+H] +。
实施例14
Figure PCTCN2020133933-appb-000081
化合物14-1
0℃下，向1A-2(11.8克，80.72毫摩尔)的THF(100mL)溶液中加入氢化钠(5.41克，135.14毫摩尔，60％纯度)，升温至20℃搅拌30分钟。0℃下，向该混合液中加入11-1(10克，67.57毫摩尔)，升温至20℃搅拌4小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并后的萃取液浓缩，经柱层析(PE/EA＝100/0至80/1，V/V)分离得14-1。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.55-7.49(m,1H),6.90(d,J＝7.4Hz,1H),6.71(d,J＝8.2Hz,1H),4.71(t,J＝3.6Hz,1H),4.58-4.43(m,2H),4.05(ddd,J＝3.6,5.8,11.6Hz,1H),3.90(ddd,J＝3.2,8.0,11.4Hz,1H),3.81(ddd,J＝3.6,6.4, 11.4Hz,1H),3.58-3.49(m,1H),1.91-1.80(m,1H),1.79-1.70(m,1H),1.68-1.50(m,4H)。
化合物14-2
将14-1(10克，38.80毫摩尔)，2-1A-1(20克，78.76毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(2.75克，3.76毫摩尔)和醋酸钾(11.5克，117.18毫摩尔)置于DMF(200mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌8小时。将反应液过滤，得化合物14-2溶液。MS(ESI):m/z 268.2[M+H] +。
化合物14-3
将14-2(9.6克，35.94毫摩尔)，14-2A(6克，31.91毫摩尔)，Pd(dppf)Cl 2(2.4克，3.28毫摩尔)，和碳酸钠(7.2克，67.93毫摩尔)置于DMF(240mL)和水(48mL)混合溶剂中。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌3小时。向反应液中加入水(300mL)，用乙酸乙酯(200×2mL)萃取，有机相用饱和食盐水(100×2mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱色谱(PE/EA＝16/1至10/1，V/V)分离，得化合物14-3。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.65(dd,J＝7.4,8.2Hz,1H),7.17(d,J＝7.4Hz,1H),6.86(d,J＝8.2Hz,1H),4.74-4.71(m,1H),4.70-4.59(m,2H),4.43(t,J＝2.6Hz,2H),4.10(ddd,J＝3.2,5.8,11.6Hz,1H),3.97(t,J＝5.4Hz,2H),3.94-3.77(m,2H),3.57-3.49(m,1H),2.77(tt,J＝2.8,5.6Hz,2H),1.91-1.82(m,1H),1.80-1.71(m,1H),1.70-1.62(m,2H),1.58-1.52(m,2H)。
化合物14-4
0℃下，向14-3(2克，6.05毫摩尔)和氯碘甲烷(2克，18.16毫摩尔)的NMP(20mL)溶液中滴加入叔丁醇锂(1.45克，18.16毫摩尔)的NMP(20mL)溶液，升温至20℃搅拌12小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(50mL)和水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并后的萃取液浓缩，经柱层析(PE/EA＝20/0至8/1)分离得14-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.66-7.53(m,1H),7.04(d,J＝7.4Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,1H),6.44(d,J＝6.2Hz,1H),5.57(d,J＝6.2Hz,1H),4.74-4.67(m,1H),4.62(ddd,J＝3.8,6.2,11.6Hz,1H),4.55(t,J＝5.0Hz,1H),4.47(ddd,J＝3.8,6.4,11.7Hz,1H),4.29(d,J＝10.8Hz,1H),4.11-4.02(m,1H),3.98(d,J＝10.8Hz,1H),3.91(ddd,J＝3.2,8.0,11.2Hz,1H),3.87-3.77(m,1H),3.57-3.48(m,1H),2.78(ddd,J＝0.8,4.6,7.2Hz,1H),1.89-1.81(m,1H),1.77(d,J＝4.0Hz,1H),1.76-1.70(m,1H),1.68-1.57(m,2H),1.57-1.49(m,2H)。
化合物14-5
向14-4(1.5克，4.38毫摩尔)的甲醇(20mL)溶液中，加入Pd/C(10％，400毫克)，在氢气(15psi)氛围下，20℃下搅拌1小时。将反应液过滤后，浓缩得化合物14-5粗品。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.62-7.56(m,1H),6.93(dd,J＝4.2,7.2Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,1H),4.73(t,J＝3.6Hz,1H),4.65-4.49(m,2H),4.19-4.13(m,1H),4.09(dddd,J＝1.6,3.8,5.6,11.2Hz,1H),4.05-4.01(m,1H),3.93(ddd,J＝3.2,8.0,11.2Hz,1H),3.89-3.79(m,2H),3.58-3.48(m,2H),2.59-2.49(m,1H),2.28(dd,J＝5.0,12.4Hz,1H),2.12-2.00(m,1H),1.94-1.83(m,1H),1.82-1.72(m,1H),1.71-1.64(m,1H),1.62(s,1H),1.59-1.54(m,2H),1.49(d,J＝5.0Hz,1H)。
化合物14-6
将2-1A-1(884.79毫克，3.48毫摩尔)，[Ir(COD)OMe] 2(200毫克，301.72微摩尔)和dtbpy(162.10毫克，603.94微摩尔)置于四氢呋喃(10mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至80℃并搅拌5分钟。然后加入14-5(800毫克，2.32毫摩尔)的四氢呋喃(10mL)溶液，80℃并搅拌4小时。反应液过滤，浓缩，得化合物14-6粗品。MS(ESI):m/z 305.1[M+H-THP] +。
化合物14-7
将14-6(500毫克，1.39毫摩尔)，14-5A(600毫克，1.28毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2(93.66毫克，128.00微摩尔)和碳酸钠(271.33毫克，2.56毫摩尔)置于二氧六环(10mL)和水(2mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至80℃并搅拌2小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后加入乙酸乙酯(30mL)，用饱和食盐水(20mL×2)洗涤后浓缩，经柱层析(PE/EA＝20/1至5/1)分离得14-7。MS(ESI):m/z 623.3[M+H] +。
化合物14
向14-7(50毫克，80.30微摩尔)的二氯甲烷(1mL)中加入TFA(0.5mL)，反应液在20℃下搅拌0.5小时。将反应液用碳酸氢钠饱和溶液调pH＝8，用二氯甲烷(20×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经薄层硅胶板(PE/EA＝1/2，V/V)分离，得化合物14。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.71(s,1H),9.02-8.95(d,J＝4.8Hz,1H),8.37(s,1H),8.21-8.18(d,J＝4.8Hz,1H),7.82-7.74(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(s,1H),6.69(s,1H),4.89-4.83(t,J＝5.6Hz,1H),4.39-4.32(t,J＝5.0Hz,2H),4.10-4.05(d,J＝11.2Hz,1H),3.98-4.86(d,J＝11.4Hz,1H),3.82-3.68(m,3H),3.55-3.49(m,1H),2.61-2.55(m,1H),2.46-2.38(d,J＝5.4Hz,1H),2.23(s,3H),2.02-1.93(m,1H),1.54-1.47(d,J＝5.4Hz,1H)。MS(ESI):m/z 539.2[M+H] +。
化合物14A和14B
化合物14经SFC手性分离(手性柱DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*30mm,10μm)，流动相A：异丙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)得到化合物14A(保留时间1.702min)和化合物14B(保留时间1.815min)。化合物14A： 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.71(s,1H),9.02-8.95(d,J＝4.8Hz,1H),8.37(s,1H),8.21-8.18(d,J＝4.8Hz,1H),7.82-7.74(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(s,1H),6.69(s,1H),4.89-4.83(t,J＝5.6Hz,1H),4.39-4.32(t,J＝5.0Hz,2H),4.10-4.05(d,J＝11.2Hz,1H),3.98-4.86(d,J＝11.4Hz,1H),3.82-3.68(m,3H),3.55-3.49(m,1H),2.61-2.55(m,1H),2.46-2.38(d,J＝5.4Hz,1H),2.23(s,3H),2.02-1.93(m,1H),1.54-1.47(d,J＝5.4Hz,1H)。MS(ESI):m/z 539.2[M+H] +，100％(ee％)。化合物14B： 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.71(s,1H),9.02-8.95(d,J＝4.8Hz,1H),8.37(s,1H),8.21-8.18(d,J＝4.8Hz,1H),7.82-7.74(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(s,1H),6.69(s,1H),4.89-4.83(t,J＝5.6Hz,1H),4.39-4.32(t,J＝5.0Hz,2H),4.10-4.05(d,J＝11.2Hz,1H),3.98-4.86(d,J＝11.4Hz,1H),3.82-3.68(m,3H),3.55-3.49(m,1H),2.61-2.55(m,1H),2.46-2.38(d,J＝5.4Hz,1H),2.23(s,3H),2.02-1.93(m,1H),1.54-1.47(d,J＝5.4Hz,1H)。MS(ESI):m/z 539.2[M+H] +，100％(ee％)。
实施例15
Figure PCTCN2020133933-appb-000082
化合物15
向2-1(200毫克，409.92微摩尔)和15-1A(84.97毫克，942.81微摩尔)的甲苯(5mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(37.54毫克，40.99微摩尔)，Brettphos(44.01毫克，81.98微摩尔)和碳酸铯(267.12毫克，819.84微摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至100℃并搅拌4小时。将反应液用乙酸乙酯(10mL)稀释后过滤，滤液浓缩后，经色谱柱(硅胶)分离(HCOOH-MeCN-H 2O)，得化合物15。 1HNMR(400MHz,CD 3OD)δ8.94-8.92(d,J＝5.0Hz,1H),8.32(s,1H),8.16-8.12(dd,J＝1.0,5.0Hz,1H),7.72-7.66(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.66-7.63(d,J＝2.2Hz,1H),7.37-7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.90-6.87(d,J＝1.0Hz,1H),6.60-6.58(d,J＝1.0Hz,1H),4.60(s,2H),4.20(s,2H),4.10–4.05(m,1H),3.98-3.92(m,1H),3.64-3.61(m,1H),3.54-3.46(m,1H),2.60-2.58(m,1H),2.29(s,3H),2.06-1.98(m,1H),1.85-1.76(m,1H),1.43-1.38(m,1H),1.33(s,6H),1.06-1.04(m,1H)。MS(ESI)m/z:542.1[M+H] +。
实施例16
Figure PCTCN2020133933-appb-000083
化合物16-2
-78℃下，向16-1(10克，51.96毫摩尔)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入正丁基锂(23mL，2.5M)，搅拌30分钟。-78℃下，向该混合液中加入16-1A(4.92克，57.16毫摩尔)，升温至25℃搅拌0.5小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(40mL)，用二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并后的萃取液用无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱层析(PE/EA＝10/1至5/1，V/V)分离得化合物16-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.72(t,J＝7.8Hz,1H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.28(d,J＝7.2Hz,1H),4.35(s,1H),4.24-4.14(m,2H),4.05-4.00(m,1H),3.96-3.92(m,1H),2.45(td,J＝8.8,13.0Hz,1H),2.32-2.22(m,1H)。
化合物16-3
向16-2(6克，30.06毫摩尔)的甲苯(80mL)溶液中加入对甲苯磺酸(11.5克，60.46毫摩尔)，升温至110℃搅拌16小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL)和乙酸乙酯(100mL)，分液，有相机用饱和碳酸氢钠溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝50/1至20/1，V/V)分离得化合物16-3。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.23(dd,J＝5.2,7.8Hz,2H),6.68(quin,J＝2.0Hz,1H),5.08(dt,J＝2.0,5.0Hz,2H),4.91(dt,J＝2.0,5.0Hz,2H)。
化合物16-4
向叔丁醇钾(3.71克，33.04毫摩尔)，11-2A-1(7.3克，33.17毫摩尔)的混合物中加入DMSO(50mL)。在氮气保护下，将反应混合物在25℃并搅拌1小时。向反应液中加入16-3(1克，5.51毫摩尔)的DMSO(5mL)溶液，将反应混合物加热至70℃并搅拌6小时。向反应混合物中加入水(180mL)，用乙酸乙酯(30×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1，V/V)分离，得化合物16-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.46(t,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝7.8Hz,1H),6.88(d,J＝7.6Hz,1H),4.11-4.04(m,2H),3.89-3.78(m,2H),2.08(ddd,J＝2.8,5.2,8.0Hz,1H),1.32(dd,J＝4.4,8.0Hz,1H),1.07(t,J＝4.6Hz,1H)。
化合物16-5
将2-1A-1(1.08克，4.25毫摩尔)，[Ir(COD)OMe] 2(70毫克，105.60微摩尔)和tmphen(50毫克，211.59微摩尔)置于甲基叔丁醚(20mL)中。反应混合物在氮气保护下，加入16-4(770毫克，3.94毫摩尔)，加热至80℃搅拌3小时。反应液过滤，滤液浓缩，得化合物16-5粗品。MS(ESI):m/z 240.3[M-84+2H] +。
化合物16-6
将16-5(1.2克，3.73毫摩尔)，14-5A(1.4克，3.90毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2·DCM(300毫克，367.36微摩尔)和碳酸钠(800毫克，7.55毫摩尔)置于二氧六环(50mL)和水(10mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌3小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后加入乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝10/1至5/1)分离得16-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.92(d,J＝5.0Hz,1H),8.20(s,1H),8.11(s,1H),7.94(d,J＝5.0Hz,1H),7.60-7.51(m,2H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),7.10(d,J＝1.2Hz,1H),6.90(d,J＝1.2Hz,1H),4.19-4.14(m,2H),3.95-3.87(m,2H),2.27(s,3H),2.24-2.17(m,1H),1.48-1.41(m,1H),1.20-1.15(m,1H)。
化合物16-7
向16-6(900毫克，1.90毫摩尔)和11-3A(400毫克，2.27毫摩尔)的甲苯(30mL)溶液中，加入Pd 2dba 3(180毫克，196.57微摩尔)，Brettphos(200毫克，372.60微摩尔)和碳酸铯(1.26克，3.87毫摩尔)。在氮气保护下，将反应混合物加热至110℃并搅拌4小时。将反应液过滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1至6/1)分离，得化合物16-7。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.65(s,1H),8.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.14(d,J＝4.6Hz,1H),7.70(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),7.59(d,J＝2.2Hz,1H),7.29(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(s,1H),6.49(s,1H),4.31(br d,J＝2.8Hz,1H),4.07-3.97(m,2H),3.90-3.86(m,2H),3.79-3.69(m,2H),2.17(s,3H),2.15-2.09(m,1H),1.33(dd,J＝3.8,7.8Hz,1H),1.13(t,J＝7.2Hz,1H),0.96-0.91(m,1H),0.80(s,9H),0.00(s,6H)。
化合物16
向16-7(300毫克，488.81微摩尔)的四氢呋喃(10mL)中加入盐酸(1mL，4M)，反应液在25℃下搅拌1小时。将反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后，用NaHCO 3饱和溶液调pH＝8，用乙酸乙酯(10×3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，薄层硅胶板(PE/EA＝1/1，V/V)分离， 得化合物16。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.70(s,1H),9.06-8.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.23-8.18(d,J＝4.2Hz,1H),7.77-7.71(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.64(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.59-6.54(d,J＝1.0Hz,1H),4.86-4.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.35-4.30(t,J＝5.2Hz,2H),4.13-4.03(m,2H),3.83-3.70(m,4H),2.24(s,3H),2.22-2.08(ddd,J＝2.4,5.0,7.8Hz,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.6,7.8Hz,1H),1.02-0.96(t,J＝4.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:500.4[M+H] +。
化合物16A和16B
化合物16经SFC手性分离(手性柱DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm,5μm)，流动相A：乙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)得到化合物16A(保留时间1.487min)和化合物16B(保留时间1.590min)。
化合物16A： 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.70(s,1H),9.06-8.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.23-8.18(d,J＝4.2Hz,1H),7.77-7.71(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.64(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.59-6.54(d,J＝1.0Hz,1H),4.86-4.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.35-4.30(t,J＝5.2Hz,2H),4.13-4.03(m,2H),3.83-3.70(m,4H),2.24(s,3H),2.22-2.08(ddd,J＝2.4,5.0,7.8Hz,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.6,7.8Hz,1H),1.02-0.96(t,J＝4.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:500.4[M+H] +，100％(ee％)。化合物16B： 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.70(s,1H),9.06-8.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.23-8.18(d,J＝4.2Hz,1H),7.77-7.71(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.64(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.59-6.54(d,J＝1.0Hz,1H),4.86-4.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.35-4.30(t,J＝5.2Hz,2H),4.13-4.03(m,2H),3.83-3.70(m,4H),2.24(s,3H),2.22-2.08(ddd,J＝2.4,5.0,7.8Hz,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.6,7.8Hz,1H),1.02-0.96(t,J＝4.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:500.4[M+H] +，99.7％(ee％)。
化合物16B
Figure PCTCN2020133933-appb-000084
化合物16B-1
-70℃下，向乙腈(54.60克，1.33摩尔)的四氢呋喃(500mL)溶液中加入正丁基锂(500mL，2.5M)，搅拌1小时。-70℃下，向该混合液中加入11-1(65克，439.22毫摩尔)的四氢呋喃(200mL)溶液，搅拌1小时后升温至25℃搅拌1小时。向反应混合物中加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并后的萃取液用无水硫酸钠干燥后浓缩，得化合物16B-1粗品。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝7.4Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),3.94(s,2H)。
化合物16B-3
-30℃下，向16B-1(130克，852.01毫摩尔)和16B-2(80.5克，870.04毫摩尔)的甲基叔丁醚(1.2L)溶液中滴加入LiHMDS(940.79mL，1M)，升温至-10～0℃搅拌2小时。-30℃下，向该混合液中滴加入NaHMDS(855.26mL，1M)，升温至25℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(40mL)，反应液经浓缩得化合物16B-3粗品。
化合物16B-4
向16B-3(180克，862.71毫摩尔)的乙醇(1L)溶液中滴加入氢氧化钾(900mL，2M)，升温至80℃搅拌4小时，得化合物16B-4混合溶液。
化合物16B-5
50℃下，向该16B-4的混合液中滴加入盐酸(740mL，6M)，升温至60℃搅拌1小时。将反应混合物浓缩后除去乙醇，水相用乙酸乙酯(800mL×3)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水(500mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1至10/1)分离得化合物16B-5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.06(dd,J＝0.8,7.8Hz,1H),7.63(t,J＝7.8Hz,1H),7.16(dd,J＝0.8,7.8Hz,1H),4.41(dd,J＝4.6,9.2Hz,1H),4.29(d,J＝9.2Hz,1H),3.02-2.84(m,1H),2.12(dd,J＝4.2,7.8Hz,1H),1.54-1.38(m,1H)。
化合物16B-6
-5℃下，向16B-5(44克，209.89毫摩尔)的四氢呋喃(400mL)溶液中，加入硼氢化锂(100mL，4M)，升温至20℃下搅拌2小时。向反应混合物中缓慢加入氯化铵饱和水溶液(100mL)，过滤，滤液用水(60mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经PE/EA(10:1，80mL)打浆得化合物16B-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.07(dd,J＝0.6,7.8Hz,1H),6.92(d,J＝7.8Hz,1H),4.66-4.53(m,1H),4.32(dd,J＝4.6,8.3Hz,1H),4.10(ddd,J＝5.2,9.2,12.4Hz,1H),3.54-3.46(m,1H),3.43-3.34(m,1H),3.43-3.34(m,1H),1.76-1.59(m,1H),1.41(dd,J＝5.6,8.8Hz,1H),0.85(t,J＝5.6Hz,1H)。
化合物16B-7
0℃下，向三苯基膦(58克，221.13毫摩尔)的四氢呋喃(500mL)溶液中滴加入DEAD(45.03克，258.53毫摩尔)，0℃搅拌30分钟。0℃下，向该混合液中滴加入16B-6(40克，187.21毫摩尔)的四氢呋喃(200mL)，升温至25℃搅拌1小时。向反应混合物中加入水(100mL)和乙酸乙酯(300mL)，分液，有机相用水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱层析(PE/EA＝100/1至20/1，V/V)分离得16B-7。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.54(t,J＝7.8Hz,1H),7.12(dd,J＝0.6,7.8Hz,1H),6.95(dd,J＝0.6,7.8Hz,1H),4.18-4.13(m,2H),3.95-3.85(m,2H),2.16(ddd,J＝2.6,5.2,8.0Hz,1H),1.40(dd,J＝4.4,8.0Hz,1H),1.15(t,J＝4.6Hz,1H)。
化合物16B-8
110℃下，向叔丁醇钾(30.6克，272.70毫摩尔)和1A-2(24克，164.18毫摩尔)的二氧六环(200mL)溶液中加入16B-7(26.7克，136.47毫摩尔)，110℃搅拌1小时。反应液过滤，滤液浓缩后加入水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)。分液，有机相用水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，经柱层析(PE/EA＝50/1至20/1，V/V)分离得16B-8。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ7.50-7.42(m,1H),6.59(t,J＝8.0Hz,2H),4.70(t,J＝3.6Hz,1H),4.53-4.39(m,2H),4.20-4.16(m,1H),4.13-4.09(m,1H),4.04(ddd,J＝4.0,5.8,11.2Hz,1H),3.92-3.84(m,3H),3.80(ddd,J＝4.0,6.8,11.2Hz,1H),3.57-3.48(m,1H),2.12-2.07(m,1H),1.89-1.81(m,1H),1.79-1.71(m,1H),1.68-1.60(m,2H),1.58-1.48(m,2H),1.39(dd,J＝4.2,8.0Hz,1H),1.06(t,J＝4.4Hz,1H)。
化合物16B-9
将2-1A-1(36克，141.77毫摩尔)，[Ir(COD)OMe] 2(2克，3.02毫摩尔)和tmphen(1.6克，6.77毫摩尔)置于甲基叔丁醚(400mL)中加入16B-8(40克，130.99毫摩尔)。反应混合物在氮气保护下，加热至80℃搅拌4小时。反应液浓缩，得化合物16B-9粗品。MS(ESI):m/z 350.4[M-84+2H] +。
化合物16B-10
将16B-9(52克，120.56毫摩尔)，14-5A(48.53克，135.14毫摩尔)和Pd(dppf)Cl 2·DCM(10.4克，12.74毫摩尔)和碳酸钠(26克，245.31毫摩尔)置于二氧六环(500mL)和水(100mL)中。反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌3小时。将反应混合物过滤，滤液浓缩后加入乙酸乙酯(400mL)和水(300mL)，分液，水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并后的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析(PE/EA＝7/1至3/1)分离，得化合物16B-10。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.83(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(br s,1H),8.05(s,1H),7.86(br d,J＝4.6Hz,1H),7.53(br d,J＝8.2Hz,1H),7.40-7.32(m,1H),7.19(s,1H),6.46(s,1H),6.43(s,1H),4.62(t,J＝3.6Hz,1H),4.51-4.35(m,2H),4.13-4.06(m,1H),4.05-3.97(m,2H),3.86-3.71(m,4H),3.51-3.40(m,1H),2.18(s,3H),2.05(ddd,J＝2.6,5.0,7.8Hz,1H),1.82-1.63(m,2H),1.57-1.39(m,4H),1.37-1.30(m,1H),1.01(t,J＝4.4Hz,1H)。
化合物16B
向16B-10(60克，102.81毫摩尔)的DMF(60mL)中加入盐酸(128.51mL，4M)，反应液在40℃下搅拌2小时。将反应液加入水(2.5L)中，将得到的混合液过滤，滤饼干燥后用二氯甲烷溶解，用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱层析(PE/EA＝3/1至0/1)分离，得化合物16B粗品，将该粗品置于PE/EA(4:1，150mL)的混合溶液中搅拌，过滤得化合物16B。 1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.70(s,1H),9.06-8.95(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.23-8.18(d,J＝4.2Hz,1H),7.77-7.71(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),7.68-7.64(d,J＝2.2Hz,1H),7.39-7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.59-6.54(d,J＝1.0Hz,1H),4.86-4.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.35-4.30(t,J＝5.2Hz,2H),4.13-4.03(m,2H),3.83-3.70(m,4H),2.24(s,3H),2.22-2.08(ddd,J＝2.4,5.0,7.8Hz,1H),1.40-1.32(dd,J＝3.6,7.8Hz,1H),1.02-0.96(t,J＝4.4Hz,1H)。MS(ESI)m/z:500.4[M+H] +，100％ee(手性柱DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm,5μm)，流动相A：乙醇(含0.05％DIEA)；流动相B：二氧化碳)保留时间1.592min)。
实验例1：c-RAF酶活性抑制实验
实验材料：
实验材料 品牌货号
cRAF蛋白 Creative BioMart-RAF1-416H
MEK1蛋白 Invitrogen-PR3984A
ADP-Glo激酶检测试剂盒 Promega-V9102
Tris-HCl,pH 7.4 Sigma-T2663-1L
MgCl 2 Sigma-63020-1L
NaCl Sigma-S5150
DTT Invitrogen-P2325
Triton X-100 Sigma-X100
H 2O Gibco-15230-162
384中间板 Greiner-781280
384实验板 PerkinElmer-6007299
实验步骤：
(1)化合物准备：
用DMSO将待测化合物及参考化合物稀释到100μM，并用Echo对化合物进行3倍梯度稀释，得到11个浓度梯度的目标板。
(2)实验流程：
1)缓冲液配制：50mM Tris-HCl(pH 7.4)，3.5mM MgCl 2，150mM NaCl，1mM DTT，0.02％Triton X-100，H 2O；
2)用缓冲液配置MEK1和ATP的混合液，向384中间板中加入5μL底物混合液；
3)用缓冲液将cRAF酶稀释，向384中间板中加入5μL；
4)用Bravo转移5μL反应混合液到384实验板中，离心15秒后放入23℃恒温箱中孵育。
5)1小时后，向384实验板中加入5μL ADP-Glo，震荡，离心15秒后放入23℃恒温箱中孵育。
6)40分钟后，向384实验板中加入10μL激酶检测试剂，震荡，离心15秒后放入23℃恒温箱中孵育。
7)1小时后，在Envision上读板。
实验结果：
化合物 c-RAF IC 50(μM) 化合物 c-RAF IC 50(μM)
化合物1A 0.0025 化合物1B 0.0020
化合物2 0.0027 化合物3 0.0017
化合物5 0.0010 化合物6 0.0009
化合物7 0.0025 化合物8 0.0011
化合物9 0.0012 化合物10 0.0025
化合物11 0.0028 化合物16 0.0008
化合物16B 0.0006 / /
实验结论：本发明化合物具有较好的c-RAF酶抑制活性。
实验例2：Calu-6(Kras Q61K)抗增殖活性实验
实验材料：
1)实验试剂耗材
名称 品牌货号
EMEM培养基 维森特-320-005-CL
胎牛血清 Biosera-FB-1058/500
0.25％胰蛋白酶 源培-S310KJ
双抗(青霉素、链霉素) Procell-PB180120
CellTiter Glo Promega-G7573
细胞板 Corning-3610
2)实验仪器
名称 品牌货号
细胞计数板 求精
Victor Nivo PerkinElmer
实验步骤：
细胞接种:
(1)细胞培养基：89％EMEM，10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素；
(2)除去细胞培养瓶中原有培养基，用胰酶消化细胞后计数，用培养基将细胞悬液稀释到铺板所需的细胞密度3.75×10 4个细胞每毫升；
(3)在细胞板四周每孔中加入100μL培养基，向其它孔中加入80μL细胞悬液，放入含5％CO 2的37℃培养箱中培养过夜。
加药:
用Echo对化合物进行梯度稀释和加药，然后将细胞板放回到培养箱中培养三天；
读板、分析数据：
加CTG并读板：向细胞板的每个孔中加入20μL CellTiterGlo，避光震荡10min，在Victor Nivo上读板。
实验结果：
Figure PCTCN2020133933-appb-000085
Figure PCTCN2020133933-appb-000086
实验结论：本发明化合物具有一定的Calu-6细胞抗增殖活性。
实验例3：HCT-116(Kras G13D)抗增殖活性实验
实验材料：
1)实验试剂耗材
名称 品牌货号
Mc’Coy 5A培养基 BI-01-075-1ACS
胎牛血清 Biosera-FB-1058/500
0.25％胰蛋白酶 源培-S310KJ
双抗(青霉素、链霉素) Procell-PB180120
CellTiter Glo Promega-G7573
细胞板 Corning-3610
2)实验仪器
名称 品牌货号
细胞计数板 求精
Victor Nivo PerkinElmer
实验步骤：
细胞接种:
(1)细胞培养基：89％Mc’Coy 5A，10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素；
(2)除去细胞培养瓶中原有培养基，用胰酶消化细胞后计数，用培养基将细胞悬液稀释到铺板所需的细胞密度2.5×10 4个细胞每毫升；
(3)在细胞板四周每孔中加入100μL培养基，向其它孔中加入80μL细胞悬液，放入含5％CO 2的37℃培养箱中培养过夜。
加药:
对化合物进行梯度稀释和加药，然后将细胞板放回到培养箱中培养三天；
读板、分析数据：
加CTG并读板：向细胞板的每个孔中加入20μL CellTiterGlo，避光震荡10min，在Victor Nivo上读板。
实验结果：
Figure PCTCN2020133933-appb-000087
实验结论：本发明化合物具有一定的HCT-116(Kras G13D)细胞抗增殖活性。
实验例4：HCT116(Kras G13D)ERK磷酸化抑制试验
实验材料：
1.试剂耗材
试剂 品牌货号
人ERK磷酸化蛋白高灵敏检测试剂盒 Cisbio-64AERPEH
RPMI1640培养基 Gibco-22400089
胎牛血清 Hyclone-SV30087.03
96HTRF微孔板 Cisbio-66PL96025
96微孔板 COSTAR-3599
DMSO Sigma-D2650-100mL
0.05％Trypsin-EDTA Gibco-25300-062
2.主要仪器
仪器 生产厂家 型号
生物安全柜 AIRTECH BSC-1304IIA2
二氧化碳培养箱 Thermo 311
细胞计数仪 BECKMAN Vi-cellXR
酶标仪 PerkinElmer Envision
离心机 Eppendorf Centrifuge 5810R
3.细胞信息
表1 细胞信息
细胞名称 来源 货号
HCT116 ATCC ATCC-HTB-132
实验步骤和方法：
1)复苏细胞并培养至对数生长期，用胰酶消化，种96孔板，放入培养箱中孵育过夜。
2)将DMSO溶解的系列梯度化合物加入96孔板中，放回至培养箱中孵育1小时。
3)取出细胞板，去上清，加入细胞裂解液(含1％的封闭肽)室温孵育裂解30分钟。
4)每孔转移16μL细胞裂解液至HTRF板中，随后加入配置好的抗体混合液4μL。
5)孵育过夜后用Envision读板，根据ratio(Ex665/Ex615荧光强度的比值)得到拟合的曲线并根据Graphpad的四参数拟合公式Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))计算得出EC 50。
实验结果：
Figure PCTCN2020133933-appb-000088
实验结论：本发明化合物具有一定的HCT-116ERK磷酸化抑制活性。
实验例5：Calu-6(Kras Q61K)ERK磷酸化抑制试验
实验材料：
试剂耗材
试剂 品牌货号
人ERK磷酸化蛋白高灵敏检测试剂盒 Cisbio-64AERPEH
RPMI1640培养基 Gibco-22400089
胎牛血清 Hyclone-SV30087.03
96HTRF微孔板 Cisbio-66PL96025
96微孔板 COSTAR-3599
DMSO Sigma-D2650-100mL
0.05％Trypsin-EDTA Gibco-25300-062
主要仪器
仪器 生产厂家 型号
生物安全柜 AIRTECH BSC-1304IIA2
二氧化碳培养箱 Thermo 311
细胞计数仪 BECKMAN Vi-cellXR
酶标仪 PerkinElmer Envision
离心机 Eppendorf Centrifuge 5810R
细胞信息：
细胞名称 来源 货号
Calu6 ATCC ATCC-HTB-56
实验步骤和方法：
1)复苏细胞并培养至对数生长期，用胰酶消化，种96孔板，放入培养箱中孵育过夜。
2)将DMSO溶解的系列梯度化合物加入96孔板中，放回至培养箱中孵育1小时。
3)取出细胞板，加入细胞裂解液(含1％的封闭肽)室温孵育裂解30分钟。
4)每孔转移16μL细胞裂解液至HTRF板中，随后加入配置好的抗体混合液4μL。
5)孵育过夜后用Envision读板，根据ratio(Ex665/Ex615荧光强度的比值)得到拟合的曲线并根据Graphpad的四参数拟合公式Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))计算得出EC 50。
实验结果：
Figure PCTCN2020133933-appb-000089
实验结论：本发明化合物具有一定的Calu-6ERK磷酸化抑制活性。
实验例6：人源肺癌Calu-6细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学实验
实验材料：
1.1实验动物及饲养环境
1.1.1实验动物
种属：小鼠
品系：BALB/c裸小鼠
到货周龄：6-8周龄
性别：雌性
1.1.2饲养环境
动物在SPF级动物房以IVC(独立送风系统，恒温恒湿)笼具饲养(每笼3-5只)
温度：20-26℃
湿度：40-70％
1.2化合物信息
名称 分子量 纯度(％) 含量(mg) 保存条件
化合物1 518.49 99.21 380.0 RT
化合物16B 499.48 99.44 655.0 RT
1.3肿瘤组织或细胞信息
细胞：人肺癌Calu-6细胞体外培养，EMEM培养基中加0.2Units/mL bovine insulin，10％胎牛血清，37℃ 5％CO 2孵箱培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种。
1.4其它试剂信息
名称 生产厂家 货号 保存条件
胎牛血清 Hyclone SV30087.03 -20℃
Trypsin gibco 25200-072 -20℃
EMEM培养基 ATCC ATCC30-2003 2-8℃
1.5仪器信息
名称 生产厂家 型号
二氧化碳培养箱 赛莫飞世尔(Thermo Fisher) Heracell240i
低温高速离心机 艾本德(Eppendorf) 5810R
分析天平 赛多利斯(Sartorius) SECURA225D-1CN
普通天平 常州天之平仪器设备有限公司 EL-2KJ
数显游标卡尺 三丰 0～150mm
实验方法与步骤：
2.1肿瘤细胞接种
细胞接种：将0.2mL Calu-6细胞(1:1与基质胶配比)皮下接种于每只小鼠的右后背，肿瘤平均体积达到173mm 3时开始分组给药。
2.2分组
表2 实验动物分组及给药方案
Figure PCTCN2020133933-appb-000090
注：1:每组小鼠数目；2:给药体积参数：根据小鼠体重10μL/g。如果体重下降超过15％，则停药，直到体重恢复到10％以内再给药；3：0.5％MC(甲基纤维素)。
2.3受试物的配制
表3 受试物配制方法
Figure PCTCN2020133933-appb-000091
Figure PCTCN2020133933-appb-000092
注1：在给动物给药前需要轻轻将药物充分混匀，solutol为聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯。
2.4肿瘤测量和实验指标
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％(T RTV：治疗组RTV平均值；C RTV：阴性对照组RTV平均值)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝V t/V 0，其中V 0是分组给药时(即D0)测量所得肿瘤体积，V t为某一次测量时的肿瘤体积，T RTV与C RTV取同一天数据。
TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
2.5统计分析
统计分析基于试验结束时RTV的数据运用SPSS软件进行分析。组间比较用one-way ANOVA进行分析，方差不齐(F值有显著性差异)，应用Games-Howell法进行检验。p<0.05认为有显著性差异。
3.实验结果
3.1受试物对人肺癌裸鼠皮下移植肿瘤生长的抑制作用
本实验评价了受试物在人肺癌异种移植瘤模型中的药效，以溶剂对照组为参照。各组在不同时间点的瘤体积如图1、图3所示。给药组化合物1(100mg/kg)，其T/C为18.5％，TGI为100.9％，有显著抑瘤作用(P＜0.01)，人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予化合物后的肿瘤生长曲线见图1。给药组化合物16B(100mg/kg)的T/C为11.4％，TGI为99.1％，有显著抑瘤作用(P＜0.01)。人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予化合物后的肿瘤生长曲线见图3。
3.2体重变化情况
小鼠体重、状态未见异常。受试物对小鼠体重的影响见图2和图4。
实验结论：
本发明化合物对人肺癌Calu-6细胞皮下异种移植瘤模型荷瘤鼠生长有显著的抑制作用。
实验例7：小鼠体内药代动力学研究实验
实验目的
检测本发明化合物在小鼠体内的药代动力学参数
实验方案
1)实验药品：化合物16B；
2)实验动物：4只雌性CD-1小鼠，分为2组，每组2只；
3)药物配制：称取适量药物溶解于solutol(5％体积)、DMSO(5％体积)和PEG-300(25％体 积)的水溶液中，用于注射给药。称取适量药物分散于5％的solutol水溶液(80％体积)，再加入PEG-400(20％体积)，混合均匀，用于灌胃给药。solutol为聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯。
实验操作
第一组动物通过静脉注射给予剂量为2mg/kg、浓度为1mg/mL的化合物。动物于给药后0.117、0.333、1、2、4、7和24小时采集血浆样品；第二组动物通过灌胃给予剂量为100mg/kg、浓度为10mg/mL的化合物。动物于给药后0.0833、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采集血浆样品；使用LC-MS/MS方法测定各点的药物浓度，得出测试药物的动力学参数如下表：
Figure PCTCN2020133933-appb-000093
注：--表示不存在
实验结论
本发明化合物有良好的小鼠体内药代动力学性质。

Claims (20)

  1. 式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2020133933-appb-100001
    其中，
    X和Y分别独立地选自CH和N；
    L选自-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O) 2-；
    L 1选自-CH 2-和单键；
    Z 1和Z 2分别独立地选自CH和N；
    R 1和R 2分别独立地选自H、F和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R a取代；
    R 3选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100002
    R 4选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R b取代；
    R 5选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R c取代；
    R 6选自H和F；
    R 7选自H和CN；
    R 8选自H和CH 3；
    R 9选自H、F和CH 3；
    R a分别独立地选自F、Cl、Br、I；
    R b分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
    R c分别独立地选自F、Cl、Br和I。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自式(I’)，
    Figure PCTCN2020133933-appb-100003
    其中，
    X和Y分别独立地选自CH和N；
    L选自-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O) 2-；
    Z 1和Z 2分别独立地选自CH和N；
    R 1和R 2分别独立地选自H、F和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R a取代；
    R 3选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100004
    R 4选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R b取代；
    R 5选自H和C 1～3烷基，所述C 1～3烷基任选被1、2或3个R c取代；
    R 6选自H和F；
    R 7选自H和CN；
    R 8选自H和CH 3；
    R 9选自H、F和CH 3；
    R a分别独立地选自F、Cl、Br、I；
    R b分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
    R c分别独立地选自F、Cl、Br和I。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1和R 2分别独立地选自H和F。
  4. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 3选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100005
    Figure PCTCN2020133933-appb-100006
  5. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 4选自H、CH 3和CH 2CH 3。
  6. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 5选自CH 3。
  7. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100007
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100008
  8. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100009
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100010
  9. 根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100011
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100012
  10. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100013
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100014
  11. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100015
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100016
  12. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2020133933-appb-100017
    选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100018
    Figure PCTCN2020133933-appb-100019
  13. 根据权利要求1和3～6任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100020
    其中，R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R 9、Z 1和Z 2如权利要求1～5任意一项所定义。
  14. 根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100021
    其中，R 1、R 2、R 3和R 7如权利要求13所定义。
  15. 化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100022
    Figure PCTCN2020133933-appb-100023
  16. 根据权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
    Figure PCTCN2020133933-appb-100024
  17. 式(IV-1)、(IV-2)、(IV-3)和(IV-4)化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2020133933-appb-100025
    其中，
    X 1选自卤素、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs、
    Figure PCTCN2020133933-appb-100026
    Figure PCTCN2020133933-appb-100027
    X 2选自卤素、OH、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs和H；
    R 1、R 2、R 5、R 6、R 7、R 9、X、Y、Z 1和Z 2如权利要求1所定义。
  18. 式(V)化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2020133933-appb-100028
    其中，
    X 1选自卤素、-SO 2Me、-OMs、OTf、OTs、
    Figure PCTCN2020133933-appb-100029
  19. 根据权利要求1～18任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐在制备RAF激酶抑制剂中的应用。
  20. 根据权利要求1～18任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗癌症药物中的应用。
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